附件：同種異體植入性醫(yī)療器械病毒滅活工藝驗證技術(shù)審查指導(dǎo)原則（食藥監(jiān)辦械函[2011]116號）.doc

同種異體植入性醫(yī)療器械病毒滅活工藝驗證
技術(shù)審查指導(dǎo)原則

一、前言

同種異體植入性醫(yī)療器械是以同種來源組織為原料經(jīng)加工或組成的產(chǎn)品。

我國目前對同種異體植入性醫(yī)療器械產(chǎn)品組織供體的病毒篩選多采用檢測血清中病毒特異性抗體或抗原的方法，其中對人免疫缺陷病毒（HIV）還要求檢測血清中的病毒核酸。但是，盡管對供體進(jìn)行了嚴(yán)格的篩選，仍然存在漏檢和未知病毒污染的風(fēng)險，以及生產(chǎn)過程中帶入外源病毒的風(fēng)險。因此，要求同種異體植入性醫(yī)療器械產(chǎn)品在生產(chǎn)過程中采用有效的病毒滅活工藝，并對病毒滅活工藝的有效性進(jìn)行科學(xué)的驗證。

本指導(dǎo)原則是對同種異體植入性醫(yī)療器械生產(chǎn)過程中特定病毒滅活工藝的效果進(jìn)行驗證的一般要求，申請人/生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)依據(jù)具體產(chǎn)品的特性對注冊申報資料的內(nèi)容進(jìn)行充實和細(xì)化，如采用的病毒滅活工藝及相關(guān)參數(shù)等，并依據(jù)具體產(chǎn)品的特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用。

本指導(dǎo)原則是對申請人/生產(chǎn)企業(yè)和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將進(jìn)行適時的調(diào)整。

二、適用范圍

本指導(dǎo)原則適用于需要對生產(chǎn)過程中特定病毒滅活工藝的效果進(jìn)行驗證的同種異體植入性醫(yī)療器械。

三、基本要求

（一）常用的病毒滅活方法

多種方法可用于同種異體植入性醫(yī)療器械的病毒滅活，此處僅對常用的病毒滅活方法進(jìn)行簡要敘述。企業(yè)應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的特性選擇合適的病毒滅活工藝。無論采用何種工藝，均應(yīng)綜合考慮以下問題，包括病毒滅活效果的驗證；病毒滅活工藝對產(chǎn)品的影響；病毒滅活工藝本身的公認(rèn)性、可靠性、重現(xiàn)性、易放大性及經(jīng)濟(jì)性。

1.巴斯德消毒法（巴氏消毒法）

巴氏消毒法是濕熱滅活法之一，是國內(nèi)外公認(rèn)的病毒滅活方法，已在人血白蛋白制品中成功應(yīng)用了數(shù)十年，滅活條件已很完善。該滅活方法可滅活脂包膜和部分非脂包膜病毒。同種異體植入性醫(yī)療器械在充分清洗血液及骨髓成分后，可運用該方法進(jìn)行病毒滅活。采用該方法時應(yīng)考慮溫度分布的均一性和滅活時間。

2.干熱滅活法

干熱滅活法主要用于凍干制品的病毒滅活。該方法的病毒滅活效果已為實驗室驗證和臨床應(yīng)用所肯定，可滅活HIV、乙型肝炎病毒（HBV）、丙型肝炎病毒（HCV）和甲型肝炎病毒（HAV）等多種病毒。干熱滅活法的優(yōu)勢是可用于凍干后的同種異體植入性醫(yī)療器械。采用該方法時應(yīng)考慮溫度分布的均一性、凍干工藝和產(chǎn)品水分殘留量等。

3.γ射線輻照滅活法

γ射線輻照滅活法的主要優(yōu)點包括滅活效率高、穿透力強(qiáng)、劑量易控制、無有害物質(zhì)殘留、無明顯溫度升高等。該方法主要通過破壞核酸而滅活病毒。由于病毒在不同介質(zhì)中對射線的抗性不同，該方法用于同種異體植入性醫(yī)療器械的病毒滅活時，應(yīng)盡量去除產(chǎn)品中的宿主組織和細(xì)胞，例如同種異體骨應(yīng)充分清洗血液及骨髓成分。應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的特性確定輻照劑量。采用該方法時應(yīng)考慮輻照劑量的分布和滅活時間。

4.過氧乙酸-乙醇滅活法

過氧乙酸具有極強(qiáng)的病毒滅活能力；乙醇可降低溶液的表面張力，有助于消毒劑完全滲透入同種異體植入性醫(yī)療器械中。過氧乙酸-乙醇滅活法是一種可靠的病毒滅活方法，可滅活脊髓灰質(zhì)炎病毒（PV）、HIV、偽狂犬病病毒（PRV）；牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）；豬細(xì)小病毒（PPV）等多種病毒，其用于同種異體植入性醫(yī)療器械病毒滅活的效果已為實驗室和臨床試驗所證實。采用該方法時應(yīng)嚴(yán)格控制人用安全過氧乙酸殘留量限制。

5.乙醇滅活法

乙醇是臨床上最為常用的表面消毒劑。該方法對多數(shù)有包膜病毒，如單純皰疹病毒、HIV等具有滅活作用。在用于同種異體骨的病毒滅活時，應(yīng)充分清洗血液及骨髓成分；同時因乙醇具有強(qiáng)揮發(fā)性，應(yīng)采用浸泡處理，注意防止高溫和明火。

（二）病毒滅活工藝的驗證

1.指示病毒的選擇

應(yīng)選擇可能污染的病毒，或理化性質(zhì)相似的病毒。在病毒顆粒的大小、核酸類型以及有無包膜等方面應(yīng)具有代表性，應(yīng)包括一種對物理和/或化學(xué)處理有明顯抗性的病毒。應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品的特性及所采用的病毒滅活工藝，參照下表選擇適宜的指示病毒，至少應(yīng)包括HIV、HBV和HCV的指示病毒以及非包膜病毒。

表1 可經(jīng)同種異體植入性醫(yī)療器械傳播疾病的相關(guān)病毒及可選用的指示病毒（舉例）

注：DHBV：鴨乙型肝炎病毒；CPV：犬細(xì)小病毒。

2.染毒方法

由于同種異體植入性醫(yī)療器械是固體，經(jīng)清洗處理后不含游離蛋白及細(xì)胞成分，建議采用浸泡法染毒。病毒滅活零時的滴度應(yīng)至少≥106/mL，可根據(jù)產(chǎn)品和病毒的特點，選擇合適的浸泡溫度、時間及其他條件。

3.方案設(shè)計

（1）試驗分組：應(yīng)進(jìn)行合理分組，注意設(shè)置全面的對照組，以確保結(jié)果的科學(xué)性。建議至少包括細(xì)胞空白對照組、病毒對照組、病毒滅活方法細(xì)胞毒性對照組、病毒滅活方法終止效果驗證組及試驗組。其中，病毒對照組的滴度是計算滅活量的基礎(chǔ)，應(yīng)證實其病毒的零時滴度≥106/mL。病毒滅活方法終止效果驗證組需采用稀釋、中和或其他適宜方法終止病毒滅活方法的作用，其病毒滴度應(yīng)與病毒對照組相當(dāng)，以證實病毒滅活方法能夠在設(shè)定的時間終止作用。試驗組至少應(yīng)有適宜的時間點（包括零時），以闡明病毒滅活的動力學(xué)，包括病毒滅活速率和滅活曲線。

（2）觀察指標(biāo)：

①滅活病毒的滴度，采用細(xì)胞病變或其他適宜的指標(biāo)。

②病毒滅活速率、滅活曲線。以列表和做圖形式報告驗證結(jié)果。

（3）病毒滅活效果的判定

應(yīng)綜合判斷病毒滅活的有效性，除了考慮病毒滅活的量以外，還必須考慮如下因素，審慎評價每次驗證結(jié)果。

①所選擇的病毒是否適宜，驗證的設(shè)計是否合理。

②病毒滴度降低量：病毒滅活零時的滴度為污染了病毒的組織釋放的病毒量，通過與病毒滅活后測定的殘留病毒量的比較，計算出該方法實際滅活病毒量。病毒滴度降低量≥4 logs，表示該方法滅活病毒有效。如病毒降低量＜4 logs時，應(yīng)盲傳三代，如仍無病毒檢出，可認(rèn)為是有效的病毒滅活方法。

③病毒滅活動力學(xué)：病毒滅活通常不是簡單的一級反應(yīng)，往往起始反應(yīng)速率快，其后變慢。如果病毒滅活速率隨時間明顯降低，表示該方法可能無效，或者殘留的指示病毒對該滅活方法有抵抗力，說明該步病毒滅活方法無效。

（4）如果生產(chǎn)過程中包含了滅活原理不同的兩種或兩種以上的病毒滅活工藝，應(yīng)該分別進(jìn)行病毒滅活效果驗證。

4．舉例說明病毒滅活效果的判斷

（1）加入6 logs 病毒，剩余4 logs 病毒，該病毒滅活工藝無效。

（2）加入6 logs 病毒，但由于產(chǎn)品本身的細(xì)胞毒作用使得檢測靈敏度限值為4 logs ，僅能證明滅活2 logs 的病毒。此種情況需改變試驗設(shè)計重新進(jìn)行驗證，或者應(yīng)盲傳三代，如仍無病毒檢出，可認(rèn)為是有效的病毒滅活方法。

（3）加入6 logs 病毒，但仍可測定2 logs 的剩余病毒，且清除病毒的量可重復(fù)，并不受工藝的影響，應(yīng)認(rèn)為是有效的滅活病毒的方法。

（4）加入6 logs病毒 ，之后未檢測出病毒。但是由于檢測靈敏度限值為2 logs ，僅能認(rèn)為大約滅活了4 logs 病毒。事實上可能等于或大于4 logs ，因此應(yīng)判定此方法清除的病毒量≥4 logs。

（5）病毒滅活動力學(xué)是非常重要的觀察指標(biāo)。如巴氏消毒法，如果病毒殘留量很快降到最低檢出限度值，說明此方法滅活病毒效果很好。如果病毒滅活速率緩慢，在滅活結(jié)束時才達(dá)到最低檢出限度值，不能認(rèn)為是一個有效的病毒滅活方法。這就是說，評價驗證結(jié)果不能僅考慮病毒降低量，同時也要考慮病毒滅活動力學(xué)。

5．其他需考慮的問題

（1）病毒滅活驗證研究應(yīng)在具有相應(yīng)資質(zhì)的單位完成。

（2）如果樣品必須做進(jìn)一步處理，或不同時間取出的樣品要在同一時間進(jìn)行測定，應(yīng)考慮這些處理方法對病毒檢測結(jié)果的影響。

（3）模擬的生產(chǎn)工藝參數(shù)應(yīng)盡可能與實際的生產(chǎn)工藝相一致，如pH、溫度、反應(yīng)時間等。應(yīng)分析生產(chǎn)工藝中各種參數(shù)的偏差對病毒滅活效果的影響。

（4）病毒滅活工藝對不同類型病毒滅活的選擇性。

（三）病毒滅活工藝的再驗證

生產(chǎn)過程發(fā)生改變且可能影響特定病毒滅活工藝的效果時；被滅活前產(chǎn)品的組成或pH值發(fā)生改變時，均需對病毒滅活工藝的效果進(jìn)行再驗證。

四、名詞解釋

1．同種異體植入性醫(yī)療器械：是指以人體來源組織為原料加工或組成的產(chǎn)品，例如同種異體骨、肌腱、脫細(xì)胞異體真皮等。

2．植入性醫(yī)療器械：用于下列目的的醫(yī)療器械：

－ 全部導(dǎo)入人體；

－ 替代上皮表面或眼表面；

通過外科侵入方法，保留在上述操作位置的器械。通過外科侵入方法，部分導(dǎo)入人體保留至少30天的器械，也認(rèn)作是植入性器械。

3．病毒滅活工藝：是指生產(chǎn)企業(yè)采用特定的病毒滅活方法對其產(chǎn)品進(jìn)行病毒滅活。

五、參考文獻(xiàn)

1．《血液制品去除／滅活病毒技術(shù)方法及驗證指導(dǎo)原則》（國藥監(jiān)注〔2002〕160號）

2．《消毒技術(shù)規(guī)范》衛(wèi)生部2002版

3.YY/T 0340-2002 《外科植入物 基本原則》