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人紅細(xì)胞反定型試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2016年第131號）

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對人紅細(xì)胞反定型試劑注冊申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評部門審評注冊申報(bào)資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是對人紅細(xì)胞反定型試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供申請人和審查人員使用的指導(dǎo)文件，不涉及注冊審批等行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、范圍

人紅細(xì)胞反定型試劑用于人ABO血型的反定型，測定被檢者血清中有無相應(yīng)的抗A或抗B抗體，輔助正定型結(jié)果判斷ABO血型。

本指導(dǎo)原則適用于人紅細(xì)胞反定型試劑，同時(shí)適用于不同的檢測方法,如試管法、柱凝集法、微孔板法等，但不適用于血源篩查用人紅細(xì)胞反定型試劑。

本指導(dǎo)原則僅包括對人反定型紅細(xì)胞試劑注冊申報(bào)資料中部分項(xiàng)目的要求，適用于進(jìn)行產(chǎn)品注冊和相關(guān)許可事項(xiàng)變更的產(chǎn)品。其他未盡事宜，應(yīng)當(dāng)符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號）（以下簡稱《辦法》）等相關(guān)法規(guī)要求。

二、基本要求

（一）綜述資料

綜述資料的撰寫應(yīng)符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）（以下簡稱“44號公告”）的相關(guān)要求。內(nèi)容主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價(jià)以及同類產(chǎn)品在國內(nèi)外批準(zhǔn)上市的情況介紹等內(nèi)容，其中同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應(yīng)著重從抗原性、特異性、親和力、溶血率、有效期等方面寫明擬申報(bào)產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的異同。

（二）主要原材料研究資料

主要原材料研究資料應(yīng)包括主要組成成分（紅細(xì)胞及細(xì)胞保存液成分等）的選擇、制備及其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究資料。

1.紅細(xì)胞的選擇及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。需詳細(xì)描述紅細(xì)胞的來源。紅細(xì)胞來源應(yīng)穩(wěn)定、可靠，采集時(shí)間期限明確。紅細(xì)胞的選擇應(yīng)遵循以下原則：

（1）如紅細(xì)胞Rh表型為陽性(D+、C+、E+)，則應(yīng)在A1、B紅細(xì)胞外增加Rh陽性的O型紅細(xì)胞。

（2）如只包含A1、B紅細(xì)胞，則兩支紅細(xì)胞均應(yīng)為Rh表型陰性（D-、E-、C- ）的混合細(xì)胞懸液。

應(yīng)對試劑紅細(xì)胞進(jìn)行以下基本特性的研究：

紅細(xì)胞獻(xiàn)血員應(yīng)進(jìn)行血型正反定型檢測，只有在正反定型結(jié)果一致的情況下，其紅細(xì)胞才能用于生產(chǎn)。

①紅細(xì)胞的抗原性：反定型紅細(xì)胞至少要包括A1和B細(xì)胞，使用A2和O細(xì)胞測定可解決部分血型測定中的異常情況，A2細(xì)胞可測定A亞型，O細(xì)胞可在測定中作為抗原陰性對照。

②紅細(xì)胞的抗原強(qiáng)度：通過考察不同凝集強(qiáng)度時(shí)抗體試劑（抗-A、抗-B、抗-H）的稀釋度，說明試劑紅細(xì)胞的抗原強(qiáng)度。

③親和力：通過與相應(yīng)抗體（抗-A、抗-B、抗-H）反應(yīng)在多少秒（如15秒）內(nèi)出現(xiàn)凝集，3分鐘內(nèi)凝集塊達(dá)到1mm2以上（或凝集強(qiáng)度≥3+）等指標(biāo)體現(xiàn)細(xì)胞親和力，可參照相關(guān)規(guī)定進(jìn)行試驗(yàn)及結(jié)果判斷?？贵w效價(jià)應(yīng)符合國家規(guī)定。

④紅細(xì)胞的特異性：使用抗-A、抗-A1抗-B、抗-H抗體進(jìn)行特異性驗(yàn)證。不與ABO血型系統(tǒng)非對應(yīng)抗體發(fā)生陽性反應(yīng)。

⑤直接抗人球蛋白試驗(yàn)：使用抗-IgG和抗-補(bǔ)體或使用多特異性抗人球蛋白試劑對試劑紅細(xì)胞進(jìn)行直接抗人球蛋白試驗(yàn)（DAT）時(shí)，結(jié)果應(yīng)為陰性。

⑥溶血率（性）：明確溶血率的試驗(yàn)方法、實(shí)驗(yàn)所需物品及溶血率的要求。可采用溶血率或游離血紅蛋白濃度的作為評價(jià)指標(biāo)。

⑦紅細(xì)胞濃度的確定：說明紅細(xì)胞懸浮液的濃度和限度（如3%±0.2%）。

2.紅細(xì)胞保存液的選擇：說明紅細(xì)胞保存液的選擇過程，提交試驗(yàn)數(shù)據(jù)說明最終確定的保存液在保證細(xì)胞的抗原性（抗原減弱）、減少溶血等方面的性能。需明確保存液中各組分的基本作用，如何防止溶血、抗原減弱、補(bǔ)體激活等。另外應(yīng)對紅細(xì)胞保存液的以下性能進(jìn)行研究：

（1）PH值。

（2）在選定的保存液環(huán)境中進(jìn)行試劑紅細(xì)胞穩(wěn)定性的研究，進(jìn)行詳細(xì)的效期穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性的研究。

3.生物安全性。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。

2.產(chǎn)品基本反應(yīng)原理介紹。

3.主要生產(chǎn)工藝過程的研究資料、每一步生產(chǎn)工藝的確認(rèn)資料及試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

4.主要反應(yīng)體系（不同的實(shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)方法）的研究資料、每一步反應(yīng)體系的確認(rèn)資料及試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

反應(yīng)體系的設(shè)置應(yīng)符合《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》等公認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范、指南或標(biāo)準(zhǔn)的要求。

（四）分析性能評估資料

申請人應(yīng)提交生產(chǎn)者在產(chǎn)品研制或成品驗(yàn)證階段對試劑進(jìn)行的所有性能驗(yàn)證的研究資料，對于每項(xiàng)分析性能的評價(jià)都應(yīng)包括具體研究目的、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、研究方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)方法等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能驗(yàn)證的背景信息也應(yīng)在申報(bào)資料中有所體現(xiàn)，包括實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)（實(shí)驗(yàn)室）、適用儀器、試劑規(guī)格、批號、臨床樣本來源等。分析性能評估的實(shí)驗(yàn)方法可以參考國內(nèi)或國際有關(guān)體外診斷產(chǎn)品性能評估的指導(dǎo)原則進(jìn)行。

產(chǎn)品性能研究所采用的各種儀器、試劑或其他物品如可能均應(yīng)采用境內(nèi)或境外已批準(zhǔn)上市的產(chǎn)品，如抗A、抗B 、抗H、抗人球蛋白試劑等。

分析性能評估試驗(yàn)中應(yīng)明確所有試驗(yàn)每種試劑的用量、試劑紅細(xì)胞的濃度、采用的試驗(yàn)方法（試管法、柱凝集法、微孔板法等）。所有試驗(yàn)方法應(yīng)符合配合使用的血型試劑的具體操作要求。

應(yīng)對申報(bào)的反定型紅細(xì)胞試劑聲稱適用的所有試驗(yàn)方法進(jìn)行分析性能評估，如試管法、柱凝集法、微孔板法等。不同試驗(yàn)方法的性能研究均應(yīng)采用至少三批產(chǎn)品進(jìn)行。對于人紅細(xì)胞反定型試劑，建議著重對以下分析性能進(jìn)行研究：

1.紅細(xì)胞的抗原性：以表1的反應(yīng)格局說明紅細(xì)胞的抗原性。

2.紅細(xì)胞的抗原強(qiáng)度：紅細(xì)胞的抗原強(qiáng)度應(yīng)不低于表2要求。

3.親和力

抗-A、抗-B、抗-H與試劑紅細(xì)胞A1、A2、B、O混合后，應(yīng)在多少秒內(nèi)（如15秒內(nèi)）出現(xiàn)肉眼可見的凝集，3分鐘內(nèi)凝集塊達(dá)到1mm2以上（或凝集強(qiáng)度≥3+）。

4.紅細(xì)胞的特異性：以表3的反應(yīng)格局說明紅細(xì)胞的特異性。

5.直接抗人球蛋白試驗(yàn)

使用抗-IgG和抗-補(bǔ)體或多特異性抗人球蛋白試劑進(jìn)行試劑紅細(xì)胞直接抗人球蛋白試驗(yàn)時(shí)，結(jié)果應(yīng)為陰性。

6.溶血率（性）

明確每種試劑紅細(xì)胞溶血率的試驗(yàn)方法、使用物品、測量方法、結(jié)果計(jì)算方法等內(nèi)容。

可采用百分比進(jìn)行結(jié)果報(bào)告，也可采用濃度單位報(bào)告結(jié)果。

7.樣本抗凝劑的選擇。

8.溶血、脂血、黃疸等樣本的干擾評價(jià)。

9.無菌試驗(yàn)。

（五）陽性判斷值

給出不同凝集強(qiáng)度的研究方法，并明確不同凝集強(qiáng)度代表的具體意義，并應(yīng)包含溶血、混合視野雙群等情況，明確具體的試驗(yàn)方法、實(shí)驗(yàn)步驟，提供不同凝集強(qiáng)度的圖例或相片。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報(bào)紅細(xì)胞試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（有效期）、運(yùn)輸穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性等研究，申請人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案，實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目應(yīng)至少包括紅細(xì)胞抗原性、凝集強(qiáng)度、特異性、溶血率、無菌試驗(yàn)。

穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

應(yīng)對樣本穩(wěn)定性進(jìn)行研究，主要包括室溫保存、冷藏和冷凍條件下的有效期驗(yàn)證，可以在合理的溫度范圍內(nèi)選擇溫度點(diǎn)（溫度范圍），每間隔一定的時(shí)間段對儲(chǔ)存樣本進(jìn)行全性能的分析驗(yàn)證，從而確認(rèn)不同類型樣本的穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對凍融次數(shù)進(jìn)行評價(jià)。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果應(yīng)分別在說明書【儲(chǔ)存條件及有效期】和【樣本要求】兩項(xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說明。

（七）臨床試驗(yàn)

臨床試驗(yàn)總體要求及臨床試驗(yàn)資料的內(nèi)容應(yīng)符合《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)指導(dǎo)原則》《辦法》、“44號公告”的規(guī)定，以下僅結(jié)合人紅細(xì)胞反定型試劑的具體特點(diǎn)對其臨床試驗(yàn)中應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注的內(nèi)容進(jìn)行闡述。

1.研究方法

該類試劑已有同類產(chǎn)品上市，按照法規(guī)要求應(yīng)選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類產(chǎn)品作為對比試劑，采用試驗(yàn)用體外診斷試劑（以下稱考核試劑）與之進(jìn)行比較研究試驗(yàn)，證明本品與已上市產(chǎn)品等效。

2.臨床試驗(yàn)單位的選擇

應(yīng)選擇符合法規(guī)要求的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)進(jìn)行臨床試驗(yàn)，不得選擇血站或采供血機(jī)構(gòu)進(jìn)行臨床試驗(yàn)。

3.病例選擇

臨床總病例數(shù)應(yīng)不少于3000例。應(yīng)采用臨床患者進(jìn)行臨床研究，應(yīng)包括對反定型檢測易產(chǎn)生干擾的病例，如選擇各種疾病患者（腫瘤患者、自身免疫病患者、血液病患者等）、老人、兒童（不同年齡段）、正反定型不一致的病例等。

4.試驗(yàn)過程

在進(jìn)行反定型紅細(xì)胞試劑臨床試驗(yàn)的過程中除與對比試劑進(jìn)行比較外，應(yīng)同時(shí)給出該樣本的正定型試驗(yàn)結(jié)果，以進(jìn)一步判斷反定型結(jié)果的準(zhǔn)確性。

產(chǎn)品如適用于不同的試驗(yàn)方法（如試管法、柱凝集法、微孔板法等），每種試驗(yàn)方法均應(yīng)分別進(jìn)行至少3000例的臨床試驗(yàn)，并明確配合使用的試劑產(chǎn)品，配合使用的產(chǎn)品均應(yīng)是境內(nèi)已上市產(chǎn)品。

5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)分別進(jìn)行正反定型結(jié)果、考核試劑與對比試劑的陽性符合率、陰性符合率、總符合率的計(jì)算，并以四格表的形式進(jìn)行列表，并對定性結(jié)果進(jìn)行Kappa檢驗(yàn)以驗(yàn)證檢測結(jié)果的一致性。

6.結(jié)果差異樣本的驗(yàn)證

對于兩種試劑檢測結(jié)果不一致（包括正反定型結(jié)果不一致、考核試劑與對比試劑結(jié)果不一致、與對比試劑凝集強(qiáng)度差異較大）的樣本，應(yīng)采用臨床上公認(rèn)較好的第三種同類試劑進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)，同時(shí)應(yīng)結(jié)合樣本的正定型結(jié)果進(jìn)行綜合分析，最終應(yīng)采用適合的方法進(jìn)行樣本血型的最終確認(rèn)。

7.臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄表應(yīng)作為臨床試驗(yàn)報(bào)告附件提交。臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)記錄表應(yīng)列明所有病例的具體臨床診斷信息、凝集強(qiáng)度和血型正反定型結(jié)果，如有不符樣本應(yīng)列明第三方確認(rèn)的結(jié)果。

（八）產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)分析資料

產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)分析資料應(yīng)符合“44號公告”的基本要求，并參照相應(yīng)的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析。風(fēng)險(xiǎn)分析中應(yīng)充分考慮到各種可能影響檢測結(jié)果的因素，如某些樣本（如腫瘤患者、自身免疫病患者、血液病患者等）在進(jìn)行血型反定型檢測時(shí)可能存在一定的干擾、影響試劑紅細(xì)胞穩(wěn)定性的諸多因素可能導(dǎo)致的細(xì)胞抗原性減弱、新生兒或老年人可能因?yàn)榭贵w較弱影響檢測結(jié)果等，申請人應(yīng)根據(jù)這些不確定的因素分析產(chǎn)品應(yīng)用可能存在的風(fēng)險(xiǎn)。

（九）產(chǎn)品技術(shù)要求

申請人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、性能評估等結(jié)果，依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的有關(guān)要求，編寫產(chǎn)品技術(shù)要求。產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《辦法》和“44號公告”的相關(guān)規(guī)定。

如果擬申報(bào)試劑已有相應(yīng)的國家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)發(fā)布，則企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的要求不得低于上述標(biāo)準(zhǔn)要求。

產(chǎn)品技術(shù)要求的性能指標(biāo)應(yīng)至少包括紅細(xì)胞的抗原性、紅細(xì)胞的抗原強(qiáng)度、紅細(xì)胞的特異性、直接抗人球蛋白試驗(yàn)、溶血率（性）、親和力。

（十）產(chǎn)品注冊檢驗(yàn)報(bào)告

根據(jù)《辦法》要求，申請注冊的第三類體外診斷試劑應(yīng)在國家食品藥品監(jiān)督管理總局認(rèn)可的、具有相應(yīng)承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)進(jìn)行連續(xù)三個(gè)生產(chǎn)批次樣品的注冊檢驗(yàn)。

（十一）產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、試驗(yàn)原理、試驗(yàn)方法、檢測結(jié)果解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息，是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報(bào)最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，境外產(chǎn)品的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說明書的所有內(nèi)容均應(yīng)與申請人提交的注冊申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明參考文獻(xiàn)的相關(guān)信息。

以下內(nèi)容僅對人紅細(xì)胞反定型試劑說明書的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說明，說明書其他內(nèi)容應(yīng)根據(jù)《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》要求進(jìn)行編寫。

1.【預(yù)期用途】

（1）寫明本試劑用于人血型的反定型檢測，同時(shí)明確不用于血源篩查，僅用于臨床檢驗(yàn)。

（2）明確產(chǎn)品的檢測結(jié)果必須結(jié)合正定型的檢測結(jié)果才能進(jìn)行ABO血型的準(zhǔn)確定型。

（3）說明與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥背景情況，說明相關(guān)的臨床或?qū)嶒?yàn)室診斷方法。

2.【儲(chǔ)存條件及有效期】

說明試劑的儲(chǔ)存條件及有效期、開瓶穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性等。

3.【樣本要求】

明確溶血、脂血、黃疸樣本是否可以使用，或提供使用此類樣本的最低要求。依據(jù)穩(wěn)定性研究結(jié)果寫明樣本穩(wěn)定性。

明確適用的抗凝劑的要求。

明確具體的樣本采集、處理方法及過程。

4.【陽性判斷值】

明確各種試驗(yàn)方法的結(jié)果判斷方法及標(biāo)準(zhǔn)，并通過不同凝集強(qiáng)度的圖例或照片進(jìn)行詳細(xì)解釋。

5.【檢驗(yàn)方法】

如適用于不同的試驗(yàn)方法請分別寫明具體方法及操作步驟。如配合其他試劑進(jìn)行試驗(yàn)，需注明試驗(yàn)方法應(yīng)完全符合配合試劑的試驗(yàn)操作要求。

質(zhì)控要求：為確保試劑測定的準(zhǔn)確性，每天要使用已知弱反應(yīng)性抗血清測定試劑細(xì)胞的反應(yīng)性。每次測定時(shí)用自身細(xì)胞進(jìn)行同步對照是有意義的。應(yīng)根據(jù)相關(guān)規(guī)定進(jìn)行每日質(zhì)控試驗(yàn)。

6.【檢驗(yàn)方法的局限性】

（1）老年人及兒童ABO 抗體弱，某些疾病患者如腫瘤、多發(fā)性骨髓瘤、消化道疾病等反定型會(huì)出現(xiàn)弱反應(yīng)，甚至陰性反應(yīng)，結(jié)果應(yīng)慎重解釋。

（2）必須與正定型血型檢測同時(shí)進(jìn)行，正反定型結(jié)果一致才能確定ABO血型。正反定型不一致時(shí)需要進(jìn)一步檢測，單獨(dú)的反定型結(jié)果不能作為判斷ABO血型的依據(jù)。

（3）絕大多數(shù)A、B和O型血的ABO抗體凝集強(qiáng)度均較強(qiáng)，如凝集強(qiáng)度為2+以下，應(yīng)對弱陽性反應(yīng)進(jìn)行確認(rèn)，以排除干擾或亞型，確保正確的ABO定型。