附件：載脂蛋白B測(cè)定試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2018年第9號(hào)）.doc

載脂蛋白B測(cè)定試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)載脂蛋白B測(cè)定試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫(xiě)，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門(mén)審評(píng)注冊(cè)申報(bào)資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是對(duì)載脂蛋白B測(cè)定試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供申請(qǐng)人和審查人員使用的指導(dǎo)文件，不涉及注冊(cè)審批等行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

載脂蛋白B測(cè)定試劑為透射比濁法（ITA），基于分光光度法原理，利用全自動(dòng)、半自動(dòng)生化分析儀或分光光度計(jì)，用于體外定量測(cè)定人血清和/或血漿中的載脂蛋白B的含量。不包括免疫散射比濁法。

依據(jù)《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號(hào)）、《食品藥品監(jiān)管總局關(guān)于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監(jiān)械管〔2013〕242號(hào)），載脂蛋白B測(cè)定試劑盒管理類別為二類，分類代號(hào)為6840。

目前載脂蛋白B的測(cè)試方法主要為免疫比濁法，血清或血漿中載脂蛋白B與試劑中的特異性抗人載脂蛋白B抗體相結(jié)合，形成不溶性免疫復(fù)合物而產(chǎn)生濁度。在340nm處測(cè)定吸光度，吸光度變化與標(biāo)本中載脂蛋白B的濃度成正相關(guān)。

二、注冊(cè)申報(bào)資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、臨床意義、產(chǎn)品描述、方法學(xué)特征、生物安全性評(píng)價(jià)、研究結(jié)果總結(jié)以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號(hào)）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號(hào)）的相關(guān)要求。相關(guān)描述應(yīng)至少包含如下內(nèi)容：

1.產(chǎn)品預(yù)期用途與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥背景情況

載脂蛋白B（ApoB）主要在肝臟合成，是低密度脂蛋白（LDL）的主要結(jié)構(gòu)蛋白，并作為L(zhǎng)DL受體的配體，可調(diào)節(jié)LDL從血漿中的清除速率。血液中ApoB的測(cè)定值直接反應(yīng)LDL含量。

ApoB水平高低的臨床意義與低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）相似，是各項(xiàng)血脂指標(biāo)中較好的動(dòng)脈硬化標(biāo)志物。在少數(shù)情況下，可出現(xiàn)高ApoB血癥而LDL-C正常的情況，提示血液中存在較多小而密的LDL，測(cè)定ApoB更有優(yōu)勢(shì)。在對(duì)高ApoB血癥的冠心病患者實(shí)施藥物干預(yù)實(shí)驗(yàn)中表明，降低ApoB水平可以減少冠心病發(fā)病及促進(jìn)粥樣斑塊的消退。此外，ApoB增高也常見(jiàn)于腎病綜合征、未控制的糖尿病、活動(dòng)性肝炎和肝功能低下患者。

注：若注冊(cè)申報(bào)產(chǎn)品聲稱臨床意義超出此內(nèi)容范圍，應(yīng)提供相關(guān)文獻(xiàn)或臨床研究依據(jù)。

2.產(chǎn)品描述

包括產(chǎn)品所采用的技術(shù)原理，主要原材料的來(lái)源及制備方法，主要生產(chǎn)工藝過(guò)程及關(guān)鍵控制點(diǎn)，質(zhì)控品、校準(zhǔn)品的制備方法、賦值過(guò)程及量值溯源情況。

3.有關(guān)生物安全性方面的說(shuō)明

體外診斷試劑中的主要原材料，如果采用動(dòng)物、病原體、人源的組織或體液等生物材料經(jīng)處理或添加某些物質(zhì)制備而成，應(yīng)當(dāng)提供相應(yīng)的說(shuō)明文件，證明其在運(yùn)輸、使用過(guò)程中對(duì)使用者和環(huán)境是安全的，并對(duì)上述原材料所采用的滅活等試驗(yàn)方法進(jìn)行說(shuō)明。人源性材料需對(duì)有關(guān)傳染?。℉IV、HBV、HCV等）病原體檢測(cè)予以說(shuō)明，并提供相關(guān)的證明文件。

4.有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評(píng)價(jià)。

5.其他

包括同類產(chǎn)品在國(guó)內(nèi)外批準(zhǔn)上市的情況。相關(guān)產(chǎn)品所采用的技術(shù)方法及臨床應(yīng)用情況，申請(qǐng)注冊(cè)產(chǎn)品與國(guó)內(nèi)外同類產(chǎn)品的異同等。

（二）主要原材料研究資料（如需提供）

主要原材料（例如抗原、抗體及其他主要原料等）的選擇、制備、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證有關(guān)研究資料；質(zhì)控品（如產(chǎn)品包含）、校準(zhǔn)品（如產(chǎn)品包含）原料選擇、制備、定值過(guò)程及試驗(yàn)資料；校準(zhǔn)品的溯源性文件，包括具體溯源鏈、實(shí)驗(yàn)方法、數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)分析等詳細(xì)資料。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料（如需提供）

主要工藝包括：配制、分裝等描述及確定依據(jù)，應(yīng)包含產(chǎn)品的工藝流程圖、關(guān)鍵工序及特殊工序的控制要求；反應(yīng)體系包括樣本采集及處理、樣本要求、反應(yīng)所需物質(zhì)用量（校準(zhǔn)品、樣本、抗體等）、反應(yīng)條件（溫度、時(shí)間等）等研究資料。

（四）分析性能評(píng)估資料

1.基本要求

（1）概述：簡(jiǎn)單描述試劑的反應(yīng)方法、試劑研制或優(yōu)化的起始時(shí)間，性能評(píng)估的目的。

（2）列舉性能評(píng)估所引用的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和資料。

（3）性能評(píng)估使用試劑的組成、包裝規(guī)格、批號(hào)、有效期、注冊(cè)證信息（如有）。

（4）校準(zhǔn)品、質(zhì)控品的生產(chǎn)企業(yè)名稱、批號(hào)、有效期、注冊(cè)證信息。

（5）使用的儀器名稱、型號(hào)；測(cè)定原理及該儀器的反應(yīng)參數(shù)。

2.性能評(píng)估

具體內(nèi)容應(yīng)至少提供3個(gè)批次試劑的分析性能評(píng)估資料，包括具體的研究方法、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)方法、研究結(jié)論等。性能評(píng)估時(shí)最好將試劑和所選用的校準(zhǔn)品、質(zhì)控品作為一個(gè)整體進(jìn)行評(píng)價(jià)，評(píng)估整個(gè)系統(tǒng)的性能是否符合要求。

性能評(píng)估應(yīng)至少包括準(zhǔn)確度、試劑空白吸光度、精密度、線性范圍、分析特異性（抗干擾能力）、分析靈敏度、其他影響檢測(cè)的因素等。

（1）準(zhǔn)確度

對(duì)測(cè)量準(zhǔn)確度的評(píng)價(jià)依次包括：與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（和/或國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品）的偏差分析、企業(yè)參考品測(cè)試、比對(duì)試驗(yàn)等方法。（企業(yè)可根據(jù)實(shí)際情況選擇合理方法進(jìn)行研究）

a.與國(guó)家（國(guó)際）標(biāo)準(zhǔn)品的偏差分析

該研究項(xiàng)目已有相應(yīng)國(guó)家（國(guó)際）標(biāo)準(zhǔn)品，優(yōu)先使用國(guó)家（國(guó)際）標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行驗(yàn)證，重點(diǎn)觀察對(duì)相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)結(jié)果的偏差情況。

b.企業(yè)參考品測(cè)試

對(duì)企業(yè)參考品進(jìn)行檢測(cè)，其測(cè)量結(jié)果的相對(duì)偏差應(yīng)不超過(guò)±10%。

c.比對(duì)試驗(yàn)

采用參考方法或國(guó)內(nèi)/國(guó)際普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的具有溯源性的已上市同類試劑，與擬申報(bào)試劑同時(shí)檢測(cè)一批臨床樣本（至少40例樣本），從測(cè)定結(jié)果間的差異了解擬申報(bào)試劑與參考方法（同類試劑）對(duì)比試劑間的偏倚。如偏倚在允許的誤差范圍內(nèi)，說(shuō)明擬申報(bào)試劑與參考方法（同類試劑）對(duì)臨床樣本測(cè)定結(jié)果基本一致，對(duì)同一份臨床樣本的醫(yī)學(xué)解釋不會(huì)產(chǎn)生差異。

在實(shí)施方法學(xué)比對(duì)前，應(yīng)分別對(duì)擬申報(bào)試劑和對(duì)比試劑進(jìn)行初步評(píng)估，只有在確認(rèn)兩者都分別符合各自相關(guān)的產(chǎn)品技術(shù)要求后方可進(jìn)行比對(duì)試驗(yàn)。方法學(xué)比對(duì)時(shí)應(yīng)注意質(zhì)量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對(duì)結(jié)果進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。其中，濃度分布應(yīng)覆蓋產(chǎn)品的可報(bào)告范圍。

（2）試劑空白吸光度

用指定空白樣品測(cè)試ApoB試劑。在測(cè)定分析儀設(shè)定參數(shù)下，記錄主波長(zhǎng)下測(cè)試反應(yīng)完成后的吸光度（A），測(cè)試結(jié)果即為試劑空白吸光度測(cè)定值，試劑空白吸光度不低于行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。

注：空白樣本可以是純水樣本、生理鹽水、零校準(zhǔn)液等。

（3）精密度

測(cè)量精密度的評(píng)估應(yīng)至少包括生理和病理兩個(gè)濃度水平的樣本進(jìn)行，分別評(píng)估重復(fù)性、批間差。

測(cè)量精密度的評(píng)價(jià)方法并無(wú)統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)可依，可根據(jù)不同的試劑特征或申請(qǐng)人的研究習(xí)慣進(jìn)行，建議參考CLSI EP15—A3。

（4）分析靈敏度

用已知濃度的樣品進(jìn)行測(cè)試，記錄在試劑盒規(guī)定參數(shù)下產(chǎn)生的吸光度改變。換算為n單位吸光度差值（ΔA），即為本產(chǎn)品的分析靈敏度。

（5）線性范圍

建立試劑線性范圍所用的樣本基質(zhì)應(yīng)盡可能與臨床實(shí)際檢測(cè)的樣本相似，理想的樣本為分析物濃度接近預(yù)期測(cè)定上限的混合人血清，且應(yīng)充分考慮多倍稀釋對(duì)樣本基質(zhì)的影響。

超出線性范圍的樣本如需稀釋后測(cè)定，應(yīng)作相關(guān)研究，明確稀釋液類型及最大可稀釋倍數(shù)，研究過(guò)程應(yīng)注意基質(zhì)效應(yīng)影響，必要時(shí)應(yīng)提供基質(zhì)效應(yīng)研究有關(guān)的資料。

（6）分析特異性

應(yīng)明確已知干擾因素對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響：可采用回收實(shí)驗(yàn)對(duì)不同濃度的溶血、黃疸、脂血對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響進(jìn)行評(píng)價(jià)，干擾物濃度的分布應(yīng)覆蓋人體生理及病理狀態(tài)下可能出現(xiàn)的物質(zhì)濃度，明確干擾物質(zhì)影響的最大濃度。藥物干擾的研究可根據(jù)需要由申請(qǐng)人選擇是否進(jìn)行或選擇何種藥物及其濃度進(jìn)行。

（7）其他需注意問(wèn)題

a.不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件應(yīng)分別評(píng)估。

不同樣本類型（血清和血漿）應(yīng)分別進(jìn)行分析性能評(píng)估。對(duì)于血漿樣本，確認(rèn)最適的抗凝劑或明顯干擾檢測(cè)結(jié)果的抗凝劑。

b.校準(zhǔn)品溯源及質(zhì)控品賦值

應(yīng)參照GB/T 21415—2008《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測(cè)量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計(jì)量學(xué)溯源性》的要求，提供企業(yè)（工作）校準(zhǔn)品及試劑盒配套校準(zhǔn)品定值及不確定度的研究資料，提供質(zhì)控品賦值及其靶值范圍確定的研究資料。

c.包裝規(guī)格

注冊(cè)申請(qǐng)包含不同的包裝規(guī)格，需要對(duì)不同包裝規(guī)格進(jìn)行分析或驗(yàn)證。如不同的包裝規(guī)格產(chǎn)品間存在性能差異，提交每個(gè)包裝規(guī)格產(chǎn)品項(xiàng)目評(píng)估的試驗(yàn)資料及總結(jié)；如不同包裝規(guī)格之間不存在性能差異，需要提交包裝規(guī)格之間不存在性能差異的詳細(xì)說(shuō)明。

（五）參考區(qū)間確定資料

提供參考區(qū)間確定所采用的樣本來(lái)源、確定方法及詳細(xì)的試驗(yàn)資料，建議參考CLSI/NCCLS C28—A3C。研究結(jié)論應(yīng)與產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)【參考區(qū)間】的相應(yīng)描述保持一致。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。這里主要指試劑的穩(wěn)定性，通常包括保存期穩(wěn)定性（有效期）、開(kāi)瓶穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性（如有）等（各3個(gè)批次）。申請(qǐng)人應(yīng)至少提供保存期穩(wěn)定性和開(kāi)瓶穩(wěn)定性、干粉試劑同時(shí)應(yīng)提供復(fù)溶穩(wěn)定性研究資料。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論，應(yīng)涵蓋產(chǎn)品中受穩(wěn)定性影響的性能指標(biāo)（如準(zhǔn)確度、線性范圍、重復(fù)性、試劑空白吸光度等）。

保存期穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少3批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說(shuō)明書(shū)【儲(chǔ)存條件及有效期】和【樣本要求】?jī)身?xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。樣本在不同儲(chǔ)存條件下的穩(wěn)定性期限若有相關(guān)文獻(xiàn)中已明確說(shuō)明，亦可作為依據(jù)。

（七）生產(chǎn)及自檢記錄

提供連續(xù)三批產(chǎn)品生產(chǎn)及自檢記錄的復(fù)印件。

（八）臨床評(píng)價(jià)資料

臨床評(píng)價(jià)資料應(yīng)符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號(hào)）的要求，同時(shí)評(píng)價(jià)資料的形式應(yīng)符合《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號(hào)）中臨床評(píng)價(jià)資料有關(guān)的規(guī)定。根據(jù)《關(guān)于發(fā)布第三批免于進(jìn)行臨床試驗(yàn)醫(yī)療器械目錄的通告》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2017年第170號(hào)），載脂蛋白B測(cè)定試劑可免于進(jìn)行臨床試驗(yàn)，申請(qǐng)人可依照《總局關(guān)于發(fā)布免于進(jìn)行臨床試驗(yàn)的體外診斷試劑臨床評(píng)價(jià)資料基本要求（試行）的通告》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2017年第179號(hào)）開(kāi)展評(píng)價(jià)。申請(qǐng)人如無(wú)法按要求對(duì)“目錄”中產(chǎn)品進(jìn)行臨床評(píng)價(jià)，應(yīng)進(jìn)行臨床試驗(yàn)。

臨床試驗(yàn)中的基本要求：

1.研究方法

選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市的性能不低于試驗(yàn)用體外診斷試劑的同類產(chǎn)品作為對(duì)比試劑，采用試驗(yàn)用體外診斷試劑與之進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效。

2.臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的選擇

應(yīng)選擇至少兩家經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局備案的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)，臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)有足夠的時(shí)間熟悉檢測(cè)系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評(píng)價(jià)方案。在整個(gè)實(shí)驗(yàn)中，試驗(yàn)用體外診斷試劑和對(duì)比試劑都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

3.臨床試驗(yàn)方案

臨床試驗(yàn)實(shí)施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計(jì)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計(jì)科學(xué)合理的臨床研究方案。各臨床研究機(jī)構(gòu)的方案設(shè)置應(yīng)保持一致，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過(guò)程中遵循預(yù)定的方案實(shí)施，不可隨意改動(dòng)。整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程應(yīng)在臨床研究機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過(guò)程。

試驗(yàn)方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應(yīng)記錄在案并明確說(shuō)明原因。在試驗(yàn)操作過(guò)程中和判定試驗(yàn)結(jié)果時(shí)應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)選用的對(duì)比試劑及所用機(jī)型應(yīng)保持一致，以便進(jìn)行合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。另外，試驗(yàn)用體外診斷試劑的樣本類型應(yīng)與產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)一致，且不應(yīng)超越對(duì)比試劑對(duì)樣本類型的檢測(cè)要求，如果選擇了對(duì)比試劑適用樣本類型以外的樣本，則應(yīng)采用其他合理方法對(duì)額外的樣本類型進(jìn)行驗(yàn)證。

開(kāi)展體外診斷試劑臨床試驗(yàn)，申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)按照試驗(yàn)用體外診斷試劑的類別、風(fēng)險(xiǎn)、預(yù)期用途等特性，組織制定科學(xué)、合理的臨床試驗(yàn)方案。一般應(yīng)當(dāng)包括以下內(nèi)容：

（1）一般信息（包括產(chǎn)品信息、臨床試驗(yàn)開(kāi)展的時(shí)間和人員等相關(guān)信息、申請(qǐng)人相關(guān)信息等）。

（2）臨床試驗(yàn)的背景資料。

（3）試驗(yàn)?zāi)康摹?/p>

（4）試驗(yàn)設(shè)計(jì)。

（5）評(píng)價(jià)方法。

（6）統(tǒng)計(jì)方法。

（7）對(duì)臨床試驗(yàn)方案修正的規(guī)定。

（8）臨床試驗(yàn)涉及的倫理問(wèn)題和說(shuō)明、《知情同意書(shū)》文本（如有）。

（9）數(shù)據(jù)處理與記錄保存。

（10）其他需要說(shuō)明的內(nèi)容。

4.研究對(duì)象選擇

臨床試驗(yàn)應(yīng)選擇具有特定癥狀/體征人群作為研究對(duì)象。申請(qǐng)人在建立病例納入標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)考慮到不同人群的差異，盡量覆蓋各類適用人群。在進(jìn)行結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析時(shí)，建議對(duì)各類人群分別進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析?？傮w樣本數(shù)不少于200例，異常值樣本數(shù)不少于60例，樣本中待測(cè)物濃度應(yīng)覆蓋試驗(yàn)用體外診斷試劑線性范圍，且盡可能均勻分布。

實(shí)驗(yàn)中，盡可能使用新鮮樣本，如需貯存，應(yīng)明確貯存條件及能否凍融；血漿應(yīng)明確抗凝劑的要求。

申報(bào)的樣本類型均應(yīng)在臨床試驗(yàn)中進(jìn)行驗(yàn)證。如果聲稱同時(shí)適用于血清和血漿樣本，可完成一個(gè)樣本類型（血清或血漿）不少于200例的臨床研究，同時(shí)可選至少100例同源樣本進(jìn)行血漿和血清比對(duì)研究，其中不同濃度樣本分布情況與總例數(shù)中分布情況應(yīng)一致。

如產(chǎn)品發(fā)生涉及檢測(cè)條件優(yōu)化、增加與原樣本類型具有可比性的其他樣本類型等變更事項(xiàng)，臨床樣本總數(shù)至少為100例，并在至少兩家臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開(kāi)展臨床試驗(yàn)；變更主要原材料的供應(yīng)商、參考區(qū)間及增加臨床適應(yīng)癥等變更事項(xiàng)，應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品具體變更情況，酌情增加臨床試驗(yàn)總樣本數(shù)。

5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

對(duì)臨床試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法，如相關(guān)分析、線性回歸、一致性分析、絕對(duì)偏倚/偏差及相對(duì)偏倚/偏差分析等。對(duì)于對(duì)比實(shí)驗(yàn)的等效性研究，最常用是對(duì)試驗(yàn)用體外診斷試劑和對(duì)比試劑兩組檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)及線性回歸分析，應(yīng)重點(diǎn)觀察相關(guān)系數(shù)（r值）或判定系數(shù)（R2）、回歸擬合方程（斜率和y軸截距）等指標(biāo)。結(jié)合臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)的正/偏態(tài)分布情況，建議統(tǒng)計(jì)學(xué)負(fù)責(zé)人選擇合理的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行分析，統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測(cè)結(jié)果無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)假設(shè)，即評(píng)價(jià)試驗(yàn)用體外診斷試劑與對(duì)比試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。

6.結(jié)果差異樣本的驗(yàn)證

對(duì)于比較研究試驗(yàn)中測(cè)定結(jié)果不符的樣本，應(yīng)采用“金標(biāo)準(zhǔn)”或其他合理的方法進(jìn)行復(fù)核，以便對(duì)臨床試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析。如無(wú)需復(fù)核，應(yīng)詳細(xì)說(shuō)明理由。

7.臨床試驗(yàn)總結(jié)報(bào)告撰寫(xiě)

根據(jù)《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則的通告》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號(hào)）的要求，臨床試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該對(duì)試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對(duì)整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過(guò)程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法。申請(qǐng)人或臨床試驗(yàn)牽頭單位應(yīng)對(duì)各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的報(bào)告進(jìn)行匯總，并完成臨床試驗(yàn)總結(jié)報(bào)告。

（九）產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)分析資料

申請(qǐng)人應(yīng)考慮產(chǎn)品壽命周期的各個(gè)環(huán)節(jié)，從預(yù)期用途、可能的使用錯(cuò)誤、與安全性有關(guān)的特征、已知及可預(yù)見(jiàn)的危害等方面的判定以及對(duì)患者風(fēng)險(xiǎn)的估計(jì)進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分析，應(yīng)符合YY/T 0316—2016《醫(yī)療器械 風(fēng)險(xiǎn)管理對(duì)醫(yī)療器械的應(yīng)用》的要求。

（十）產(chǎn)品技術(shù)要求

產(chǎn)品技術(shù)要求應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號(hào)）、《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號(hào)）和《關(guān)于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫(xiě)指導(dǎo)原則的通告》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號(hào)）的相關(guān)規(guī)定。產(chǎn)品技術(shù)要求的性能指標(biāo)應(yīng)不低于行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)YY/T 1421—2016《載脂蛋白B測(cè)定試劑（盒）》有關(guān)技術(shù)指標(biāo)的要求。

1.主要性能指標(biāo)

1.1外觀

應(yīng)當(dāng)包括試劑的外觀。

1.2裝量

試劑裝量應(yīng)不少于標(biāo)示裝量或規(guī)定限

1.3試劑空白吸光度

在37℃、340nm、1cm光徑條件下，用試劑設(shè)定的反應(yīng)參數(shù)測(cè)試空白樣本，記錄試劑吸光度值（A），建議試劑空白吸光度應(yīng)不大于0.15。

1.4分析靈敏度

用已知濃度（1.00±0.50）g/L的樣本測(cè)試試劑，記錄試劑（盒）在規(guī)定的參數(shù)下的吸光度差值。換算為1.00g/L載脂蛋白B的吸光度差值（ΔA），應(yīng)不小于0.15。

1.5線性區(qū)間

試劑線性區(qū)間應(yīng)覆蓋[0.40，2.00]g/L

1.5.1線性相關(guān)系數(shù)（r）應(yīng)不小于0.990。

1.5.2[0.40，2.00]g/L區(qū)間內(nèi)，線性偏差應(yīng)不超過(guò)±10%。

用接近線性區(qū)間下限的低濃度樣品稀釋接近線性區(qū)間上限的高濃度樣品，混合成至少5個(gè)有效稀釋濃度（xi），分別測(cè)試試劑，每個(gè)稀釋濃度測(cè)試3次，分別求出測(cè)定結(jié)果的均值（yi）。以稀釋濃度（xi）為自變量，以測(cè)定結(jié)果均值（yi）為因變量求出線性回歸方程。按公式（1）計(jì)算線性回歸的相關(guān)系數(shù)（r）。

稀釋濃度（xi）代入線性回歸方程，計(jì)算yi的估計(jì)值及yi與估計(jì)值的相對(duì)偏差。

1.6精密度

1.6.1重復(fù)性

在重復(fù)性條件下，用已知濃度的質(zhì)控品或血清樣本，重復(fù)測(cè)試至少10次，分別計(jì)算測(cè)量值的平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差（SD）。計(jì)算變異系數(shù)（CV）應(yīng)不大于3%。

1.6.2批內(nèi)瓶間差（適用于干粉或凍干試劑）

用線性范圍內(nèi)的樣本或質(zhì)控品測(cè)試同一批號(hào)的10瓶待檢試劑，并計(jì)算10個(gè)測(cè)量值的平均值（1）和標(biāo)準(zhǔn)差（s1）。

用線性范圍內(nèi)的樣本或質(zhì)控品對(duì)相同批號(hào)的1個(gè)待檢試劑重復(fù)測(cè)試10次，計(jì)算結(jié)果的均值（2）和標(biāo)準(zhǔn)差（s2）。按公式（2）、（3）計(jì)算瓶間差的變異系數(shù)（CV），批內(nèi)瓶間差均應(yīng)不大于5%。

當(dāng)s1＜s2時(shí)，令CV=0

1.6.3批間差

用（1.00±0.50）g/L的血清樣本或質(zhì)控品分別測(cè)試3個(gè)不同批號(hào)的試劑，每個(gè)批號(hào)測(cè)試3次，分別計(jì)算每批3次測(cè)定的均值（i=1,2,3），按公式（4）、（5）計(jì)算相對(duì)極差（R）。

式中：

試劑批間相對(duì)極差應(yīng)不大于10%。

1.7準(zhǔn)確度

1.7.1相對(duì)偏差：相對(duì)偏差應(yīng)不超過(guò)±10%。

用評(píng)價(jià)常規(guī)方法的有證參考物質(zhì)（CRM）或其他公認(rèn)的參考物質(zhì)對(duì)試劑進(jìn)行測(cè)試，重復(fù)檢測(cè)3次，取測(cè)試結(jié)果均值（M）按式（6）計(jì)算相對(duì)偏差（B）。

式中：

B—相對(duì)偏差；

M—測(cè)試結(jié)果均值；

T—有證參考物質(zhì)標(biāo)示值，或各濃度人源樣本定值。

1.7.2比對(duì)試驗(yàn)：相關(guān)系數(shù)r≥0.975，斜率應(yīng)在[0.9，1.1]內(nèi)；樣本濃度≤0.50g/L時(shí)，偏差應(yīng)不大于0.10g/L；樣本濃度＞0.50g/L時(shí)，相對(duì)偏差應(yīng)不大于15%；95%檢測(cè)樣本應(yīng)符合上述要求。

參照CLSL EP9—A2的方法，用不少于40個(gè)在檢測(cè)范圍內(nèi)不同濃度的人源樣品，用生產(chǎn)企業(yè)指定的分析系統(tǒng)（具有溯源性）作為比對(duì)方法，每份樣品按待測(cè)試劑操作方法及比對(duì)方法分別測(cè)試。用線性回歸方法計(jì)算兩組結(jié)果的相關(guān)系數(shù)及每個(gè)濃度點(diǎn)的相對(duì)偏差或絕對(duì)偏差。

1.7.3企業(yè)參考品測(cè)試

用企業(yè)參考品對(duì)試劑進(jìn)行測(cè)試，重復(fù)檢測(cè)3次，取測(cè)試結(jié)果均值（M），計(jì)算相對(duì)偏差（B）應(yīng)不超過(guò)±10%。

1.8穩(wěn)定性

可選用以下方法之一進(jìn)行驗(yàn)證：

1.8.1效期穩(wěn)定性：生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)規(guī)定產(chǎn)品的有效期。取到有效期后的樣品檢測(cè)試劑空白吸光度、分析靈敏度、線性、準(zhǔn)確度和批內(nèi)重復(fù)性應(yīng)符合技術(shù)要求。

1.8.2熱穩(wěn)定性試驗(yàn)：檢測(cè)線性區(qū)間、準(zhǔn)確度應(yīng)符合技術(shù)要求。

1.9校準(zhǔn)品和質(zhì)控品的性能指標(biāo)（如產(chǎn)品中包含）

應(yīng)至少包含外觀、裝量、準(zhǔn)確度、均一性、穩(wěn)定性。凍干型校準(zhǔn)品和質(zhì)控品還應(yīng)檢測(cè)批內(nèi)瓶間差和復(fù)溶穩(wěn)定性。附錄中應(yīng)明確校準(zhǔn)品、質(zhì)控品的賦值程序。

載脂蛋白B已有國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品，試劑盒配套校準(zhǔn)品和質(zhì)控品，應(yīng)參照GB/T 21415—2008《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測(cè)量 校準(zhǔn)品和控制物質(zhì)賦值的計(jì)量學(xué)溯源性》的要求溯源至國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)品，并提供校準(zhǔn)品溯源性說(shuō)明及質(zhì)控品賦值說(shuō)明。

（十一）產(chǎn)品注冊(cè)檢驗(yàn)報(bào)告

首次申請(qǐng)注冊(cè)的載脂蛋白B測(cè)定試劑盒，應(yīng)該在具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗(yàn)資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢測(cè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行注冊(cè)檢驗(yàn)。出具注冊(cè)檢驗(yàn)報(bào)告和產(chǎn)品技術(shù)要求預(yù)評(píng)價(jià)意見(jiàn)。

（十二）產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

說(shuō)明書(shū)承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、試驗(yàn)方法、檢測(cè)結(jié)果解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息，是指導(dǎo)使用人員正確操作、臨床醫(yī)生準(zhǔn)確理解和合理應(yīng)用試驗(yàn)結(jié)果的重要技術(shù)性文件。產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的格式應(yīng)符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則的通告》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014第17號(hào)）的要求。下面對(duì)測(cè)定ApoB試劑說(shuō)明書(shū)的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。

1.【產(chǎn)品名稱】

通用名稱應(yīng)當(dāng)按照《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號(hào)）規(guī)定的命名原則進(jìn)行命名，可適當(dāng)參考相關(guān)“分類目錄”和/或國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。

（1）通用名稱：載脂蛋白B測(cè)定試劑盒（免疫比濁法）

（2）英文名稱，例如：Apolipoprotein B test reagent（kit）

2.【包裝規(guī)格】

注明可測(cè)試的樣本數(shù)或裝量，如××測(cè)試/盒、××人份/盒、××mL，除國(guó)際通用計(jì)量單位外，其余內(nèi)容均應(yīng)采用中文進(jìn)行表述。如產(chǎn)品有不同組分，可以寫(xiě)明組分名稱。

（1）包裝規(guī)格應(yīng)明確單、雙試劑類型。

（2）不得多于產(chǎn)品技術(shù)要求中所列的包裝規(guī)格。

（3）如不同包裝規(guī)格有對(duì)應(yīng)不同的機(jī)型，應(yīng)分別明確適用機(jī)型。

3.【預(yù)期用途】

應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：

（1）說(shuō)明試劑盒用于體外定量檢測(cè)人血清和/或血漿中載脂蛋白B的含量。

（2）與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥背景情況，異常情況常見(jiàn)于哪些疾病，其升高或降低可能有哪些醫(yī)學(xué)解釋。

作為支持性資料，申請(qǐng)人應(yīng)提供由教科書(shū)、臨床專著、核心期刊文獻(xiàn)或英文SCI文獻(xiàn)等有關(guān)臨床適應(yīng)癥背景的資料。

4.【檢驗(yàn)原理】

應(yīng)結(jié)合產(chǎn)品主要成分簡(jiǎn)要說(shuō)明檢驗(yàn)的原理、方法。

血清或血漿中載脂蛋白B與試劑中的特異性抗人載脂蛋白B抗體相結(jié)合，形成不溶性免疫復(fù)合物而產(chǎn)生濁度。在特定波長(zhǎng)（如340nm處）測(cè)定吸光度，吸光度變化與標(biāo)本中載脂蛋白B的濃度成正相關(guān)。

5.【主要組成成分】

應(yīng)明確以下內(nèi)容：

試劑盒提供的試劑組分的名稱、數(shù)量、每個(gè)組成成分在反應(yīng)體系中的比例或濃度。明確說(shuō)明不同批號(hào)試劑盒中各組分是否可以互換。

如檢測(cè)中需使用校準(zhǔn)品或質(zhì)控品，應(yīng)明確說(shuō)明，并提供校準(zhǔn)品溯源性，溯源性應(yīng)寫(xiě)明溯源的最高級(jí)別，包括標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)或參考物的發(fā)布單位及編號(hào)，質(zhì)控品應(yīng)明確靶值范圍等。

6.【儲(chǔ)存條件及有效期】

（1）應(yīng)明確未開(kāi)封的試劑實(shí)際儲(chǔ)存條件及有效期，開(kāi)瓶穩(wěn)定期。干粉試劑應(yīng)明確復(fù)溶穩(wěn)定期。

（2）說(shuō)明產(chǎn)品的儲(chǔ)存條件，如：2—8℃、避免/禁止冷凍或-18℃以下等。其他影響穩(wěn)定性的條件，如：光線、濕度等也必須說(shuō)明。

（3）如試劑盒各組分的穩(wěn)定性不一致，則應(yīng)對(duì)各組分的儲(chǔ)存條件和有效期分別進(jìn)行描述。

注：保存條件不應(yīng)有模糊表述，穩(wěn)定期限應(yīng)以月或日為單位。

7.【適用儀器】

（1）說(shuō)明可適用的儀器，并提供與儀器有關(guān)的必要信息以便用戶能夠做出最好的選擇。

（2）應(yīng)寫(xiě)明具體適用儀器的型號(hào)，不能泛指某一系列儀器。

8.【樣本要求】

重點(diǎn)明確以下內(nèi)容：

樣本類型、為保證樣本各組分穩(wěn)定所必需的抗凝劑或保護(hù)劑等、保存期限及保存條件（短期、長(zhǎng)期），能夠保證樣本穩(wěn)定的儲(chǔ)存、處理和運(yùn)輸方法、已知的干擾物等。如有血漿樣本，應(yīng)注明對(duì)抗凝劑的要求。

9.【檢驗(yàn)方法】

詳細(xì)說(shuō)明試驗(yàn)操作的各個(gè)步驟，包括：

（1）試劑配制方法、注意事項(xiàng)。

（2）試驗(yàn)條件：反應(yīng)溫度、測(cè)定主/副波長(zhǎng)、試劑用量、樣本用量、測(cè)定方法、反應(yīng)類型、反應(yīng)方向、反應(yīng)時(shí)間等以及試驗(yàn)過(guò)程中的注意事項(xiàng)。

（3）校準(zhǔn)程序（如果需要）：校準(zhǔn)品的使用方法、注意事項(xiàng)、校準(zhǔn)曲線的繪制。

（4）質(zhì)量控制程序：質(zhì)控品的使用方法、對(duì)質(zhì)控結(jié)果的必要解釋以及推薦的質(zhì)控周期等。

（5）如果超出線性范圍，樣本需要稀釋測(cè)定時(shí)，應(yīng)根據(jù)試劑特性說(shuō)明稀釋液的種類及最大稀釋倍數(shù)。

10.【參考區(qū)間】

應(yīng)注明常用樣本類型及反應(yīng)方式的參考區(qū)間，并說(shuō)明參考區(qū)間確定方法。注明“由于地理、人種、性別和年齡等差異，建議各實(shí)驗(yàn)室建立自己的參考區(qū)間”。

11.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

說(shuō)明可能對(duì)試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響的因素；說(shuō)明在何種情況下需要進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)。

12.【檢驗(yàn)方法的局限性】

說(shuō)明該檢驗(yàn)方法的局限性，如：存在的干擾因素，明確黃疸、溶血、脂濁及藥物等內(nèi)、外源性干擾物對(duì)測(cè)定的影響，同時(shí)列出干擾物的具體濃度。

13.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

至少應(yīng)詳述以下性能指標(biāo)，性能指標(biāo)應(yīng)不低于行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)有關(guān)技術(shù)指標(biāo)的要求。

（1）試劑空白吸光度。

（2）分析靈敏度。

（3）準(zhǔn)確度。

（4）精密度（重復(fù)性和批間差）。

（5）線性區(qū)間（線性相關(guān)系數(shù)和線性偏差）。

14.【注意事項(xiàng)】

應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

（1）本試劑盒僅供體外檢測(cè)使用，試劑中含有的化學(xué)成分應(yīng)說(shuō)明接觸人體后產(chǎn)生不良的影響后果。

（2）有關(guān)人源組分的警告，如：試劑盒內(nèi)的質(zhì)控品、校準(zhǔn)品或其他人源組分，雖已經(jīng)通過(guò)了HBs-Ag、HIV1/2-Ab、HCV-Ab等項(xiàng)目的檢測(cè)，但截至目前，沒(méi)有任何一項(xiàng)檢測(cè)可以確保絕對(duì)安全，故仍應(yīng)將這些組分作為潛在傳染源對(duì)待。

（3）樣本：對(duì)所有樣本和反應(yīng)廢棄物都應(yīng)視為傳染源對(duì)待。

（4）其他有關(guān)載脂蛋白B測(cè)定的注意事項(xiàng)。

15.【標(biāo)識(shí)的解釋】

如有圖形或符號(hào)，請(qǐng)解釋其代表的意義。

16.【參考文獻(xiàn)】

應(yīng)當(dāng)注明在編制說(shuō)明書(shū)時(shí)所引用的參考文獻(xiàn)，格式要規(guī)范。

17.【基本信息】

符合《關(guān)于發(fā)布體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則的通告》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號(hào)）對(duì)基本信息的要求。

18.【醫(yī)療器械注冊(cè)證編號(hào)/產(chǎn)品技術(shù)要求編號(hào)】

產(chǎn)品的注冊(cè)證編號(hào)/產(chǎn)品技術(shù)要求編號(hào)

19.【說(shuō)明書(shū)核準(zhǔn)日期及修改日期】

注明該產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的核準(zhǔn)日期。如曾進(jìn)行過(guò)說(shuō)明書(shū)的變更申請(qǐng)，還應(yīng)該同時(shí)注明說(shuō)明書(shū)的修改日期。

三、審查關(guān)注點(diǎn)

（一）關(guān)注產(chǎn)品預(yù)期用途有關(guān)的描述是否與臨床研究結(jié)論一致。臨床研究用對(duì)比試劑和第三方確認(rèn)試劑的預(yù)期用途應(yīng)與申請(qǐng)產(chǎn)品預(yù)期用途一致。申報(bào)樣本類型應(yīng)在臨床研究中進(jìn)行驗(yàn)證。

（二）審查產(chǎn)品技術(shù)要求時(shí)應(yīng)注意產(chǎn)品應(yīng)不低于行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的有關(guān)規(guī)定。

（三）說(shuō)明書(shū)中預(yù)期用途、樣本類型、儲(chǔ)存條件及有效期、檢驗(yàn)方法、參考區(qū)間、產(chǎn)品性能指標(biāo)等描述應(yīng)分別與臨床研究資料、穩(wěn)定性研究資料、主要生產(chǎn)工藝和反應(yīng)體系研究資料、參考區(qū)間研究資料、分析性能評(píng)估資料的研究結(jié)論相一致。

（四）干粉試劑應(yīng)提供復(fù)溶穩(wěn)定性研究資料并在說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存條件及有效期中說(shuō)明。

（五）產(chǎn)品風(fēng)險(xiǎn)分析資料的撰寫(xiě)是否符合YY/T 0316—2016《醫(yī)療器械風(fēng)險(xiǎn)管理對(duì)醫(yī)療器械的應(yīng)用》的要求。

四、編寫(xiě)單位

河北省食品藥品監(jiān)督管理局。