附件：丙氨酸氨基轉移酶測定試劑注冊技術審查指導原則（2018年第8號）.doc

丙氨酸氨基轉移酶測定試劑注冊
技術審查指導原則

本指導原則旨在指導注冊申請人對丙氨酸氨基轉移酶（Alanine aminotransferase，ALT）測定試劑注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術審評部門審評注冊申報資料提供參考。

本指導原則是對丙氨酸氨基轉移酶測定試劑的一般要求，申請人應依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特征對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細化。

本指導原則是供申請人和審查人員適用的指導文件，不涉及注冊審批等行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應提供詳細的研究資料和驗證資料。應在遵循相關法規(guī)、國家標準、行業(yè)標準的前提下使用本指導原則。

本指導原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標準體系及當前認知水平下制定的，隨著法規(guī)、標準體系的不斷完善和科學技術的不斷發(fā)展，本指導原則相關內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。

一、適用范圍

丙氨酸氨基轉移酶測定試劑用于體外定量測定人血清或血漿中的丙氨酸氨基轉移酶的活性。本指導原則適用于進行首次注冊申報和相關許可事項變更的產(chǎn)品。

丙氨酸氨基轉移酶活性的測定方法有丙氨酸底物法、丙氨酸底物-丙酮酸氧化酶法和2,4-二硝基苯肼法等。丙氨酸氨基轉移酶活性的測定方法目前主要為丙氨酸底物法。本法采用的原理是在ALT的催化下，L-丙氨酸的氨基轉移至α-酮戊二酸，生成丙酮酸和L-谷氨酸。丙酮酸與NADH在LDH的催化下反應生成乳酸和NAD+。NADH在特定波長（如：340nm處）有特異吸收峰，其氧化的速率與血清中ALT的活性成正比，在此波長處測定NADH吸光度下降的速率，即可計算出ALT活性。

從方法學考慮，本指導原則適用于采用丙氨酸氨基轉移酶催化L-丙酮酸和α-酮戊二酸之間的氨基轉移反應，通過在特定波長處吸光度的變化，計算丙氨酸氨基轉移酶活性，利用全自動、半自動生化分析儀或分光光度計，在醫(yī)學實驗室進行丙氨酸氨基轉移酶定量測定所使用的臨床化學體外診斷試劑。本指導原則不適用于干式丙氨酸氨基轉移酶測定試劑以及丙氨酸氨基轉移酶同工酶試劑。

依據(jù)《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號，以下簡稱《辦法》）、《食品藥品監(jiān)管總局關于印發(fā)體外診斷試劑分類子目錄的通知》（食藥監(jiān)械管〔2013〕242號），丙氨酸氨基轉移酶檢測試劑屬于酶類檢測試劑，管理類別為二類，分類代碼為6840。

二、注冊申報資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預期用途、產(chǎn)品描述、生物安全性評價、研究結果總結以及同類產(chǎn)品上市情況介紹等內(nèi)容，應符合《辦法》和《關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）的相關要求。相關描述應至少包含如下內(nèi)容：

1.產(chǎn)品預期用途及相關的臨床適應證背景情況

（1）丙氨酸氨基轉移酶的生物學特征、結構與功能，在體內(nèi)正常和病理狀態(tài)下的代謝途徑和存在形式。

（2）與預期用途相關的臨床適應證背景情況，如臨床相關疾病的發(fā)生、實驗室診斷方法等。

2.產(chǎn)品描述：包括產(chǎn)品所采用的技術原理，主要原材料的來源及制備方法（應注明是否添加了磷酸吡哆醛），主要生產(chǎn)工藝過程，校準品（質控品）的制備方法及溯源（定值）情況。

3.有關生物安全性方面的說明：由于體外診斷試劑中的主要原材料可能是由各種動物、病原體、人源的組織和體液等生物材料經(jīng)處理或添加某些物質制備而成，人源性材料須對有關傳染病（HIV、HBV、HCV等）病原體檢測予以說明，并提供相關的證明文件。其他動物源及微生物來源的材料，應當提供相應的說明文件，為保證產(chǎn)品在運輸、使用過程中對使用者和環(huán)境的安全，應提供對上述原材料所采用的滅活等試驗方法的說明。

4.有關產(chǎn)品主要研究結果的總結和評價。

5.其他：包括同類產(chǎn)品在國內(nèi)外批準上市的情況。相關產(chǎn)品所采用的技術方法及臨床應用情況，申請注冊產(chǎn)品與國內(nèi)外同類產(chǎn)品的異同等。

（二）主要原材料的研究資料（如需提供）

包括主要反應成分、質控品、校準品等的選擇、制備、質量標準確定的方法及研究資料；校準品應提供詳細的量值溯源資料，包括定值試驗資料和溯源性文件等；質控品應提供詳細的定值資料。

（三）主要生產(chǎn)工藝和反應體系的研究資料（如需提供）

主要工藝包括：配制、分裝等描述及確定依據(jù)，應包含產(chǎn)品的工藝流程圖和關鍵控制點；反應體系包括樣本采集及處理、樣本要求、試劑用量、反應條件（溫度、時間等）等研究資料。不同適用機型的反應條件如果有差異應分別詳述。

（四）分析性能評估資料

申請人應當提交產(chǎn)品研制或成品驗證階段對試劑盒進行的所有性能驗證的研究資料，對于每項分析性能的評價都應包括具體的研究項目、實驗設計、研究方法、可接受標準、試驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法、研究結論等詳細資料。性能評估時應將試劑和所選用的校準品、質控品作為一個整體進行評價，評估整個系統(tǒng)的性能是否符合要求。有關分析性能驗證的背景信息也應在申報資料中有所體現(xiàn)，包括實驗時間、地點、檢驗人員、適用儀器、試劑規(guī)格和批號、所選用的校準品和質控品、臨床樣本來源等。

性能評估應至少包括準確度、精密度、線性區(qū)間、分析靈敏度、分析特異性、其他影響檢測的因素等。

1.準確度

對測量準確度的評價包括：與國家標準物質（和/或國際標準物質）的偏差分析、方法學比對等方法，企業(yè)可根據(jù)實際情況選擇合理方法進行研究。

1.1與國家（國際）參考物質的比對研究

使用國家參考物質或國際參考物質作為樣本進行測試，重復測定3次，計算平均值與標示值的相對偏差。

或用由參考方法定值的高、低2個濃度的人血清對試劑盒進行測試，每個濃度樣本重復測定3次，分別取測試結果均值，計算相對偏差。

1.2回收試驗

在人血清樣品中加入一定體積標準或校準品溶液，每個濃度重復測定3次，計算回收率。

回收試驗注意事項：

1.2.1加入的標準溶液體積與血清體積比應不大于1:20或其體積比不會產(chǎn)生基質的變化。

1.2.2加入標準溶液或校準品溶液后樣品總濃度應在試劑（盒）測定線性范圍內(nèi)。

1.2.3標準溶液或校準品應有溯源性。

1.3比對試驗

采用參考方法或國內(nèi)/國際普遍認為質量較好的已上市同類試劑作為參比方法，與擬申報試劑同時檢測一批病人樣品（至少40例樣本），從測定結果間的差異了解擬申報試劑與參比方法間的偏倚。如偏倚很小或在允許的誤差范圍內(nèi)，說明兩檢測系統(tǒng)對病人標本測定結果基本相符，對同一份臨床樣本的醫(yī)學解釋，擬申報試劑與參比方法相比不會產(chǎn)生差異結果。

在實施方法學比對前，應分別對擬申報試劑和參比試劑進行初步評估，只有在確認兩者都分別符合各自相關的質量標準后方可進行比對試驗。方法學比對時應注意質量控制、樣本類型、濃度分布范圍并對結果進行合理的統(tǒng)計學分析。

2.精密度

2.1批內(nèi)精密度

測量精密度的評估應至少包括高、低兩個濃度水平的樣本進行，兩個濃度都應在試劑盒的測量范圍內(nèi)且有一定的臨床意義，通常選用該檢測指標的正常參考值附近和異常高值樣本。批內(nèi)精密度應不大于5.0%。

2.2批間精密度

用一份樣本分別測試3個不同批號的試劑，每個批號測定3次，測定均值。按相對極差（R）＝（xmax-xmin）/t×100% 公式計算。相對極差應不大于10.0%。

3.線性區(qū)間

建立試劑線性區(qū)間所用的樣本基質應盡可能與臨床實際檢測的樣本相似，理想的樣本為分析物濃度接近預期測定上限的混合人血清，且應充分考慮多倍稀釋對樣本基質的影響。

以接近線性范圍上限的高濃度（活性）樣品和接近線性區(qū)間下限的低濃度（活性）樣品，混合成至少5個稀釋濃度（xi）。分別測試試劑盒，每個稀釋濃度測試3次，分別求出測定結果的均值（yi）。以稀釋濃度（xi）為自變量，以測定結果均值（yi）為因變量求出線性回歸方程，并計算線性相關系數(shù)（r）。線性范圍上限至少達500U/L, 線性相關系數(shù)r應不小于0.9900。

4.分析靈敏度

4.1速率法

用已知濃度或活性的樣品進行測試，記錄在試劑規(guī)定參數(shù)下產(chǎn)生的吸光度改變。換算為單位濃度吸光度變化率差值或吸光度變化，應符合企業(yè)給定區(qū)間。

4.2終點法

稀釋一定濃度樣品（n單位被測物），測定吸光度，計算吸光度值與空白吸光度值有差別的樣品濃度應符合企業(yè)給定區(qū)間。

5.分析特異性

對樣本中常見的干擾物質進行檢測，如膽紅素、血紅蛋白、甘油三酯等。方法為對模擬添加樣本分別進行驗證，樣本量選擇應體現(xiàn)一定的統(tǒng)計學意義，說明樣本的制備方法及干擾實驗的評價標準，確定可接受的干擾物質極限濃度。

藥物干擾的研究可根據(jù)需要由申請人選擇是否進行或選擇何種藥物及其濃度進行。

6.校準品溯源及質控品賦值

校準品、質控品應提供詳細的量值溯源資料，包括定值試驗資料和溯源SOP文件等。應參照GB/T 21415—2008《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質賦值的計量學溯源性》的要求，提供企業(yè)（工作）校準品及試劑盒配套校準品定值及不確定度計算記錄，提供質控品賦值及其靶值范圍確定的記錄。

7.其他需注意問題

應當對多批產(chǎn)品進行性能評估，對結果進行統(tǒng)計分析。不同適用機型、不同包裝規(guī)格，應分別提交分析性能評估報告。如注冊申請中包含不同的包裝規(guī)格，需要對不同包裝規(guī)格之間的差異進行分析或驗證。如不同的包裝規(guī)格產(chǎn)品間存在性能差異，需要提交采用每個包裝規(guī)格產(chǎn)品進行的上述項目評估的試驗資料及總結。如不同包裝規(guī)格之間不存在性能差異，需要提交包裝規(guī)格之間不存在性能差異的詳細說明，具體說明不同包裝規(guī)格之間的差別及可能產(chǎn)生的影響。

（五）參考區(qū)間確定資料

應提交建立參考區(qū)間所采用樣本來源及詳細的試驗資料。應明確參考人群的篩選標準，研究各組（如性別、年齡等）例數(shù)不應低于120例。

若引用針對中國人群參考值范圍研究的相關文獻，應明確說明出處，并進行驗證。參考值研究結論應與說明書【參考區(qū)間】的相應描述保持一致。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。

試劑的穩(wěn)定性包括實時穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性、開瓶（待機）穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制等，申請人應至少提供3個生產(chǎn)批次的實時穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性和運輸穩(wěn)定性研究資料，包括研究目的、材料和方法、研究結論等，研究應涵蓋產(chǎn)品的主要性能指標，申請人應至少能提供在實際儲存條件下超過聲稱有效期的除裝量和批間差外的評價資料。試劑的穩(wěn)定性研究應注意選取代表性包裝規(guī)格進行研究（例如：校準品穩(wěn)定性應選取最易受影響的最小裝量，干粉劑型應提供復溶穩(wěn)定性研究資料），實時穩(wěn)定性研究的時間間隔應不大于3個月。

適用樣本的穩(wěn)定性主要包括室溫保存、冷藏和冷凍條件下的有效期驗證，可以在合理溫度范圍內(nèi)選擇溫度點（溫度范圍），每間隔一定的時間段即對儲存樣本進行全性能的分析驗證，從而確認不同類型樣本的效期穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應對凍融次數(shù)進行評價。樣本在不同儲存條件下的穩(wěn)定性期限若有相關文獻中已明確說明，亦可作為依據(jù)。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結果均應在說明書【儲存條件及有效期】和【樣本要求】兩項中進行詳細說明。

（七）臨床評價資料

臨床評價資料應符合《關于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的要求，同時研究資料的形式應符合《關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號）臨床研究資料有關的規(guī)定。根據(jù)《關于發(fā)布第三批免于進行臨床試驗醫(yī)療器械目錄的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2017年第170號），丙氨酸氨基轉移酶檢測試劑可免于進行臨床試驗，申請人可依照《總局關于發(fā)布免于進行臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價資料基本要求（試行）的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2017年第179號）開展評價。申請人如無法按要求對“目錄”中產(chǎn)品進行臨床評價，應進行臨床試驗。

下面僅對臨床試驗中的基本問題進行闡述。

1.研究方法

選擇境內(nèi)已批準上市的性能不低于擬申報產(chǎn)品的同類產(chǎn)品作為對照試劑，采用試驗用體外診斷試劑（以下稱待評試劑）與之進行對比試驗研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效。

2.臨床研究單位的選擇

應在至少兩家經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理總局備案的臨床試驗機構開展臨床試驗。臨床試驗機構實驗操作人員應有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（試劑、質控及操作程序等），熟悉評價方案。在整個實驗中，待評試劑和對照試劑都應處于有效的質量控制下，最大限度保證試驗數(shù)據(jù)的準確性及可重復性。

3.臨床試驗方案

臨床試驗實施前，研究人員應從流行病學、統(tǒng)計學、臨床醫(yī)學、檢驗醫(yī)學等多方面考慮，設計科學合理的臨床研究方案。建議臨床前開展預試驗工作，最大限度地控制試驗誤差。各臨床試驗機構的方案設置應保持一致，且保證在整個臨床試驗過程中遵循預定的方案實施，不可隨意改動。整個試驗過程應在臨床試驗機構的實驗室內(nèi)并由本實驗室承擔本實驗的技術人員操作完成，申報單位的技術人員除進行必要的技術指導外，不得隨意干涉實驗進程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

試驗方案中應確定嚴格的病例納入/排除標準，任何已經(jīng)入選的病例再被排除出臨床研究都應記錄在案并明確說明原因。在試驗操作過程中和判定試驗結果時應采用盲法以保證試驗結果的客觀性。各臨床試驗機構選用的參比試劑應保持一致，以便進行合理的統(tǒng)計學分析。另外，待評試劑的樣本類型應不超越參比試劑的樣本類型。

臨床試驗方案必須獲得臨床試驗機構倫理委員會的同意。

4.研究對象選擇

臨床試驗應選擇具有特定癥狀/體征人群作為研究對象。注冊申請人在建立病例納入標準時，應考慮到不同人群的差異，盡量覆蓋各類適用人群。在進行結果統(tǒng)計分析時，建議對各類人群分別進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析?？傮w樣本數(shù)不少于200例，異常值樣本比例應不低于試驗總量的30%。樣本中待測物濃度應覆蓋待評試劑線性范圍，且盡可能均勻分布。

應明確樣本存貯條件、可否凍融等要求及避免使用的樣本，血漿應明確抗凝劑的要求。實驗中，盡可能使用新鮮樣本，避免貯存。如無法避免使用貯存樣品時，注明貯存條件及時間，在數(shù)據(jù)分析時應考慮其影響。

如果待評試劑同時適用于血清和血漿樣本類型，可完成一個樣本類型不少于200例的臨床研究，同時驗證其中至少100例受試者的自身血清、血漿樣本測試結果間的一致性（采用待評試劑檢測），其中不同濃度樣本分布情況與總例數(shù)中分布情況應一致。也可以分別對同時適用的多個樣本類型按照《關于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）中試驗樣本量一般要求規(guī)定的200例進行試驗，異常值參照上述規(guī)定。

涉及產(chǎn)品檢測條件優(yōu)化、增加與原樣本類型具有可比性的其他樣本類型等變更事項，臨床試驗采用變更后產(chǎn)品與變更前產(chǎn)品或者已上市同類產(chǎn)品進行比對試驗，在至少2家（含2家）臨床試驗機構開展臨床試驗，總樣本數(shù)不少于100例，異常值樣本數(shù)不少于30%。變更主要原材料的供應商（新增加）、參考區(qū)間及增加臨床適應證等變更事項，應根據(jù)產(chǎn)品具體變更情況，酌情增加臨床試驗總樣本數(shù)。

5.統(tǒng)計學分析

對臨床試驗結果的統(tǒng)計應選擇合適的統(tǒng)計方法，如相關分析、線性回歸、一致性分析、絕對偏倚/偏差及相對偏倚/偏差分析等。若涉及脫落樣本應明確原因。對于對比實驗的等效性研究，最常用是對待評試劑和參比試劑兩組檢測結果的相關及線性回歸分析，應重點觀察相關系數(shù)（r值）或判定系數(shù)（R2）、回歸擬合方程（斜率和y軸截距）等指標。結合臨床試驗數(shù)據(jù)的正/偏態(tài)分布情況，建議統(tǒng)計學負責人選擇合理的統(tǒng)計學方法進行分析，統(tǒng)計分析應可以證明兩種方法的檢測結果無明顯統(tǒng)計學差異。在臨床研究方案中應明確統(tǒng)計檢驗假設，即評價待評試劑與參比試劑是否等效的標準。

6.臨床試驗總結報告撰寫

根據(jù)《關于發(fā)布體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）的要求，臨床試驗報告應該對試驗的整體設計及各個關鍵點給予清晰、完整的闡述，應該對整個臨床試驗實施過程、結果分析、結論等進行條理分明的描述，并應包括必要的基礎數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法。建議在臨床總結報告中對以下內(nèi)容進行詳述。

6.1臨床試驗總體設計及方案描述

6.1.1臨床試驗的整體管理情況、臨床試驗機構選擇、臨床主要研究人員簡介等基本情況介紹。

6.1.2納入/排除標準、不同人群的預期選擇例數(shù)及標準。

6.1.3樣本類型，樣本的收集、處理及保存等。

6.1.4統(tǒng)計學方法、統(tǒng)計軟件、評價統(tǒng)計結果的標準。

6.2具體的臨床試驗情況

6.2.1待評價試劑和參比試劑的名稱、批號、有效期及所用機型等信息。

6.2.2對各研究單位的病例數(shù)、人群分布情況進行總合，建議以列表或圖示方式給出具體例數(shù)及百分比。

6.2.3質量控制，試驗人員培訓、儀器日常維護、儀器校準、質控品運行情況，對檢測精密度、質控品回收（或測量值）、抽查結果評估。

6.2.4具體試驗過程，樣本檢測、數(shù)據(jù)收集、樣本長期保存等。

6.3統(tǒng)計學分析

6.3.1數(shù)據(jù)預處理、對異常值或離群值的處理、研究過程中是否涉及對方案的修改。

6.3.2 定量值相關性和一致性分析

用回歸分析驗證兩種試劑結果的相關性，以y=a+bx和R2的形式給出回歸分析的擬合方程，其中：y是待評試劑結果，x是參比試劑結果，b是方程斜率，a是y軸截距，R2是判定系數(shù)（通常要求R2≥0.95）。

建議給出待評試劑與參比試劑之間的差值（絕對偏倚/偏差）及比值（相對偏倚/偏差），并符合相應的要求。

6.4討論和結論

對總體結果進行總結性描述并簡要分析試驗結果，對本次臨床研究有無特別說明，最后得出臨床試驗結論。

（八）產(chǎn)品風險分析資料

對體外診斷試劑產(chǎn)品壽命周期的各個環(huán)節(jié)，從產(chǎn)品設計開發(fā)、原材料的采購控制、生產(chǎn)、預期用途、可能的使用錯誤、與安全性有關的特征、已知和可預見的危害等方面的判定以及對患者風險的估計進行風險分析、風險評價和相應的風險控制基礎上，形成風險管理報告。應當符合相關行業(yè)標準的要求。

風險分析應包含但不僅限于以下方面的內(nèi)容：

預期用途錯誤包括：設計開始時未設定預期分析物、未作適用機型驗證、未針對特定的樣本類型驗證。性能特征失效包括：精密度失效、準確度失效、非特異性、穩(wěn)定性失效、測量范圍失效、定性/定量失效、量值溯源失效、校準失效。不正確的結果包括：配方錯誤、采購的原料未能達到設計要求的性能、原材料儲存條件不正確、使用了過期的原材料、反應體系不正確、試劑與包裝材料不相容?？赡艿氖褂缅e誤包括：生產(chǎn)者未按照生產(chǎn)流程操作，檢驗者未按照原料、半成品、成品檢驗標準操作，裝配過程組分、標簽、說明書等漏裝或誤裝，成品儲存或運輸不當，客戶未參照產(chǎn)品說明書設置參數(shù)或使用。與安全性有關的特征包括：有毒化學試劑的化學污染、樣本的潛在生物污染、不可回收包裝或塑料的環(huán)境污染。

（九）產(chǎn)品技術要求

申請人應當在原材料質量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)注冊申請人產(chǎn)品研制、前期臨床評價等結果，依據(jù)國家標準、行業(yè)標準及有關文獻，按照《關于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術要求編寫指導原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的有關要求，編寫產(chǎn)品技術要求，內(nèi)容主要包含產(chǎn)品性能指標和檢驗方法。

下面就產(chǎn)品技術要求中涉及的產(chǎn)品適用的相關標準和主要性能指標等相關內(nèi)容作簡要敘述。

1.產(chǎn)品適用的相關標準

（1）GB/T 21415—2008《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質賦值的計量學溯源性》

（2）GB/T 29791.1—2013《體外診斷醫(yī)療器械 制造商提供的信息 標示 第1部分：術語定義和通用要求》

（3）GB/T 29791.2—2013《體外診斷醫(yī)療器械 制造商提供的信息 標示 第2部分：專業(yè)用體外診斷試劑》

（4）GB/T 26124—2011《臨床化學體外診斷試劑（盒）》

（5）YY/T 0638—2008《體外診斷醫(yī)療器械 生物樣品中量的測量 校準品和控制物質物中酶催化濃度賦值的計量學溯源性》

（6）YY/T 1197—2013《丙氨酸氨基轉移酶測定試劑盒（IFCC法）》

（7）WS/T 404.1—2012《臨床常用生化檢驗項目參考區(qū)間血清丙氨酸氨基轉移酶、天門冬氨酸氨基轉移酶、丙氨酸氨基轉移酶和γ-谷氨酰基轉移酶》

2.主要性能指標

2.1外觀

符合制造商規(guī)定的正常外觀要求。

2.2裝量

液體試劑的裝量應不少于標示量。

2.3試劑空白

2.3.1空白吸光度

用蒸餾水、去離子水或其他指定溶液作為空白加入工作試劑作為樣品測試時，試劑空白吸光度應不小于1.0（340nm，1cm）。

2.3.2空白吸光度變化率（終點法不適用）

用蒸餾水、去離子水或其他指定溶液作為空白加入工作試劑作為樣品測試時，試劑空白吸光度變化率△A/min（37℃，340nm，1cm）應不大于0.004。

2.4分析靈敏度

2.4.1速率法：用已知濃度或活性的樣品進行測試，記錄在試劑（盒）規(guī)定參數(shù)下產(chǎn)生的吸光度改變。換算為單位濃度吸光度變化率差值或吸光度變化應符合制造商給定區(qū)間。

2.4.2終點法：稀釋一定濃度（n單位）的樣品（檢測限樣品），測定吸光度，計算吸光度值能夠與空白吸光度區(qū)分的樣品濃度應符合制造商給定區(qū)間。

2.5線性區(qū)間

線性區(qū)間上限至少達到500 U/L。

2.5.1相關系數(shù)（r）

線性相關系數(shù)r應不小于0.9900。

2.5.2線性偏差

線性偏差應不超過申請人給定值。線性偏差應分段描述，并注意分段點的選擇。

2.6精密度

2.6.1批內(nèi)精密度

測量精密度的評估應至少包括高、低兩個濃度水平的樣本進行，兩個濃度都應在試劑盒的測量范圍內(nèi)且有一定的臨床意義，通常選用該檢測指標的正常參考值附近和異常高值樣本。批內(nèi)精密度應不大于5.0%。

2.6.2批間精密度

用一份質控品分別測試3個不同批號的試劑，每個批號測定3次，測定均值。相對極差應不大于10.0%。

2.7準確度

2.7.1相對偏差 提供參考物質或用參考方法定值的血清測定，實測值與標示值偏差應在±15.0%范圍內(nèi)。

2.7.2回收試驗 在臨床樣本中加入一定體積標準溶液（標準溶液體積與臨床樣本體積應不會產(chǎn)生基質的變化，加入標準溶液后樣品總濃度必須在試劑測定線性范圍內(nèi)），回收率應在90%—110%之間。

2.7.3比對試驗 用待測試劑盒與申請人選定分析系統(tǒng)（已在國內(nèi)上市）分別檢測不少于40個在檢測范圍內(nèi)的人源樣品，用線性回歸方法計算兩組結果的相關系數(shù)r≥0.990以及每個濃度點的偏差，偏差應不超過申請人給定值。偏差應分段描述，并注意分段點的確定。

建議按上述優(yōu)先順序，采用上述方法之一測試試劑盒的準確度。

2.8穩(wěn)定性

檢測申請人聲稱已到期試劑，產(chǎn)品性能應符合試劑空白、分析靈敏度、線性區(qū)間、精密度、準確度要求。凍干品應同時進行復溶穩(wěn)定性試驗，產(chǎn)品性能應符合試劑空白、分析靈敏度、線性區(qū)間、測量精密度、準確度要求。

2.9校準品和質控品的性能指標（如產(chǎn)品中包含）

應至少包含外觀、裝量（干粉試劑可不做）、準確性、均一性、穩(wěn)定性。凍干型校準品和質控品還應檢測批內(nèi)瓶間差和復溶穩(wěn)定性。

（十）注冊檢驗報告

具有相應醫(yī)療器械檢驗資質的醫(yī)療器械檢驗機構出具的注冊檢驗報告和產(chǎn)品技術要求預評價意見。丙氨酸氨基轉移酶項目若有相應的國家標準品、參考品發(fā)布或者更新的，應提供產(chǎn)品能夠符合國家標準品、參考品要求的檢驗報告。

（十一）產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預期用途、檢驗原理、檢測結果解釋以及注意事項等重要信息，是指導實驗室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對檢驗結果給出合理醫(yī)學解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊申報最重要的文件之一。

結合《關于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，下面對丙氨酸氨基轉移酶測定試劑盒說明書的重點內(nèi)容進行詳細說明。

1.【產(chǎn)品名稱】

通用名稱，試劑名稱由三部分組成：被測物名稱、用途、方法或原理。例如：丙氨酸氨基轉移酶測定試劑盒（丙氨酸底物法）。通用名稱應當按照《體外診斷試劑注冊管理辦法》規(guī)定的命名原則進行命名，可適當參考相關“分類目錄”和/或國家標準及行業(yè)標準。

2.【包裝規(guī)格】

注明可測試的樣本數(shù)或裝量，如××測試/盒、××人份/盒、××mL，除國際通用計量單位外，其余內(nèi)容均應采用中文進行表述。包裝規(guī)格應明確單、雙或其他多試劑類型。

3.【預期用途】

應至少包括以下幾部分內(nèi)容：

3.1說明試劑盒用于體外定量測定血清/血漿中丙氨酸氨基轉移酶的活性；同時應明確與目的檢測物相關的臨床適應證背景情況，說明相關的臨床或實驗室診斷方法等。

3.2丙氨酸氨基轉移酶異常情況常見于哪些疾病，其升高或降低可能有哪些醫(yī)學解釋。

如：丙氨酸氨基轉移酶主要用于輔助評價肝功能。ALT是反映肝損傷的靈敏指標，各種急性肝損傷（如急性傳染性肝炎及藥物或酒精中毒）時，血清ALT可在臨床癥狀（如黃疸）出現(xiàn)之前急劇升高等，并一般與病情輕重和恢復情況相平行；慢性肝炎、脂肪肝、肝硬化、肝淤血等血清ALT也可升高。另外，膽囊炎、膽石癥、胰腺炎、心肌梗死及服用某些藥物（如氯丙嗪、奎寧、水楊酸制劑等）時可見血清ALT升高。

作為支持性資料，申請人應提供由教科書、臨床專著、核心期刊文獻或英文SCI文獻等有關臨床適應證背景的資料。

4.【檢驗原理】

應結合產(chǎn)品主要成分簡要說明檢驗的原理、方法，必要時可采取圖示方法表示，檢測原理的描述應結合產(chǎn)品主要組成成分、被測物和產(chǎn)物的關系進行描述：

如：在ALT的催化下，丙氨酸的氨基轉移到α-酮戊二酸，生成丙酮酸及谷氨酸。丙酮酸與NADH在LDH的催化下反應生成乳酸和NAD-。NADH在波長340nm有特異吸收峰，其氧化的速率與血清中ALT的活性成正比，在340nm處測定NADH吸光度下降的速率，即可計算出ALT活性。

5.【主要組成成分】

應明確以下內(nèi)容：

試劑盒提供的試劑組分的名稱、比例或濃度，各組分是否可以互換；如含有校準品或質控品，除明確組成成分及生物學來源外，還應明確其定值及溯源性，溯源性應寫明溯源的最高級別，包括標準物質或參考物的發(fā)布單位及編號，質控品應明確靶值范圍。

例如：

本試劑盒由試劑1、試劑2和校準品（選購）組成：

試劑1：三羥甲基氨基甲烷緩沖液100mmol/L，L-丙氨酸500 mmol/L，乳酸脫氫酶 1700U/L

試劑2：α-酮戊二酸15mmol/L，NADH 0.18mmol/L

校準品：含有丙氨酸氨基轉移酶的溶液，校準品具有批特異性，每批定值，定值見瓶簽標示，量值可溯源至國家參考物質或國際參考物質。

6.【儲存條件及有效期】

應明確未開封的試劑實際儲存條件及有效期，開封后的待機穩(wěn)定期或開瓶穩(wěn)定期。干粉試劑應明確復溶穩(wěn)定期。

注：保存條件不應有模糊表述，如“常溫” “室溫”。

7.【適用儀器】

應明確可適用的具體品牌、型號的生化分析儀器。

8.【樣本要求】

重點明確以下內(nèi)容：樣本類型、處理、保存期限及保存條件（短期、長期），運輸條件，對已知干擾物的抗干擾性（如：存在的干擾因素，明確黃疸、溶血、脂濁及藥物等內(nèi)、外源性干擾物對測定的影響，同時列出干擾物的具體濃度）等。如有血漿樣本，應注明對抗凝劑的要求（如：草酸鹽、檸檬酸鹽、EDTA鈉鹽對丙氨酸氨基轉移酶活性造成干擾，應明確避免使用的提示）。冷藏/冷凍樣本檢測前是否需恢復室溫，可凍融次數(shù)。

9.【檢驗方法】

詳細說明試驗操作的各個步驟，包括：

9.1試劑配制方法、注意事項。

9.2試驗條件：溫度、時間、測定主/副波長、試劑用量、樣本用量、測定方法、反應類型、反應方向、反應時間等以及試驗過程中的注意事項。

9.3校準程序：校準品的使用方法、注意事項、校準曲線的繪制。

9.4質量控制程序：質控品的使用方法、質量控制方法。

9.5試驗結果的計算或讀?。簯鞔_檢驗結果的計算方法。包括對每個系數(shù)及對每個計算步驟的解釋。

10.【參考區(qū)間】

應注明常用樣本類型的正常參考區(qū)間，并說明參考值確定方法。

11.【檢驗結果的解釋】

說明可能對檢驗結果產(chǎn)生影響的因素，在何種情況下需要進行確認試驗。

12.【檢驗方法的局限性】

說明該檢驗方法的局限性。當測定值超出線性上限時，應說明使用廠家提供的專用稀釋液或明確稀釋方法，并給出稀釋最大倍數(shù)說明。

13.【產(chǎn)品性能指標】

至少應詳述以下性能指標：

13.1試劑空白。

13.2分析靈敏度。

13.3準確度。

13.4精密度（批內(nèi)精密度和批間精密度）。

13.5線性區(qū)間（線性相關系數(shù)和線性偏差）。

14.【注意事項】

應至少包括以下內(nèi)容：

14.1本試劑盒的檢測結果僅供臨床參考，對患者的臨床管理應結合其癥狀/體征、病史、其他實驗室檢查及治療反應等情況綜合考慮。

14.2本試劑盒僅供體外診斷用，試劑中含有的化學成分接觸人體后是否會產(chǎn)生不良的影響后果。

14.3采用不同方法學的試劑檢測所得結果不應直接相互比較，以免造成錯誤的醫(yī)學解釋。

14.4有關人源組分的警告，如：試劑盒內(nèi)的質控品、校準品或其他人源組分，雖已經(jīng)通過了HBs-Ag、HIV1/2-Ab、HCV-Ab等項目的檢測，但截至目前，沒有任何一項檢測可以確保絕對安全，故仍應將這些組分作為潛在傳染源對待。

14.5對所有樣本和反應廢棄物都應視為傳染源對待。

14.6其他有關丙氨酸氨基轉移酶測定的注意事項。

15.【標識的解釋】

如有圖形或符號，請解釋其代表的意義。

16.【參考文獻】

注明引用參考文獻，其書寫應清楚、易查詢且格式規(guī)范統(tǒng)一。

17.【基本信息】

17.1境內(nèi)體外診斷試劑

17.1.1注冊人與生產(chǎn)企業(yè)為同一企業(yè)的，按以下格式標注基本信息：

注冊人/生產(chǎn)企業(yè)名稱，住所，聯(lián)系方式，售后服務單位名稱，聯(lián)系方式，生產(chǎn)地址，生產(chǎn)許可證編號。

17.1.2委托生產(chǎn)的按照以下格式標注基本信息：

注冊人名稱，住所，聯(lián)系方式，售后服務單位名稱，聯(lián)系方式，受托企業(yè)的名稱，住所，生產(chǎn)地址，生產(chǎn)許可證編號。

17.2進口體外診斷試劑

按照以下格式標注基本信息：

注冊人/生產(chǎn)企業(yè)名稱，住所，生產(chǎn)地址，聯(lián)系方式，售后服務單位名稱，聯(lián)系方式，代理人的名稱，住所，聯(lián)系方式。

18.【醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術要求編號】

應當寫明醫(yī)療器械注冊證編號/產(chǎn)品技術要求編號

19.【說明書核準日期及修改日期】

應注明該產(chǎn)品說明書的核準日期。如曾進行過說明書的變更申請，還應該同時注明說明書的修改日期。

三、審查關注點

（一）產(chǎn)品技術要求中性能指標的設定及檢驗方法是否符合相關行業(yè)標準的要求；技術要求的格式是否符合《關于發(fā)布醫(yī)療器械產(chǎn)品技術要求編寫指導原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號）的相關規(guī)定。

（二）產(chǎn)品說明書的編寫內(nèi)容及格式是否符合《關于發(fā)布體外診斷試劑說明書編寫指導原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號）的要求，相關內(nèi)容是否符合《醫(yī)療器械說明書和標簽管理規(guī)定》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第6號）中對說明書的要求。應注明是否添加了磷酸吡哆醛。

（三）分析性能評估指標及結果是否支持產(chǎn)品技術要求的確定；是否滿足本指導原則中各指標驗證的要求。

（四）參考區(qū)間確定使用的方法是否合理，數(shù)據(jù)統(tǒng)計是否符合統(tǒng)計學的相關要求，結論是否和說明書聲稱一致。

（五）試劑的穩(wěn)定性研究方法是否合理，穩(wěn)定性結論是否和說明書聲稱一致。

（六）臨床試驗采用的樣本類型及病例是否滿足試劑盒聲稱的預期用途，樣本量及臨床研究單位的選擇、對比試劑的選擇、統(tǒng)計方法及研究結果、臨床方案及報告撰寫的格式等是否符合《關于發(fā)布體外診斷試劑臨床研究技術指導原則的通告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號）對相關內(nèi)容的規(guī)定。

（七）產(chǎn)品風險分析資料的撰寫是否符合YY/T 0316—2016《醫(yī)療器械風險管理對醫(yī)療器械的應用》的要求。

四、編寫單位

浙江省食品藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械審評中心。