附件：基于高通量測序技術(shù)的非小細(xì)胞肺癌相關(guān)基因變異檢測試劑臨床試驗(yàn)注冊審查指導(dǎo)原則（2024年第4號）.doc

基于高通量測序技術(shù)的非小細(xì)胞肺癌相關(guān)基因變異檢測試劑臨床試驗(yàn)注冊審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對基于高通量測序技術(shù)的非小細(xì)胞肺癌相關(guān)基因變異檢測試劑臨床試驗(yàn)的設(shè)計及開展，同時也為技術(shù)審評部門對注冊申報資料的技術(shù)審評提供參考。

本指導(dǎo)原則是針對基于高通量測序(Next Generation Sequencing, NGS)技術(shù)的非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC）相關(guān)基因變異檢測試劑臨床評價的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要詳細(xì)闡明理由，并對其科學(xué)合理性進(jìn)行驗(yàn)證，提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

本指導(dǎo)原則所闡述的基于NGS技術(shù)的NSCLC基因變異檢測試劑，是指采用NGS技術(shù)檢測NSCLC患者10%中性緩沖福爾馬林固定石蠟包埋（FFPE）組織樣本中的基因變異狀態(tài)的體外診斷試劑（以下簡稱“申報產(chǎn)品”）。

本指導(dǎo)原則適用于進(jìn)行首次注冊申報和變更注冊的產(chǎn)品。

有關(guān)此類產(chǎn)品的背景信息參見附件。

二、臨床試驗(yàn)設(shè)計

（一）臨床性能研究

1.臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)及人員

申請人應(yīng)選擇不少于3家按要求備案的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開展臨床試驗(yàn)。臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)常規(guī)開展NSCLC分子病理檢測，具有病理診斷、分子生物學(xué)等檢測的優(yōu)勢，試驗(yàn)操作人員應(yīng)有足夠的時間熟悉檢測系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)（儀器、試劑、質(zhì)控及操作程序等），熟悉評價方案。臨床試驗(yàn)整個過程均應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

2.臨床試驗(yàn)適用人群和樣本類型

適用人群為經(jīng)病理診斷為NSCLC的人群。應(yīng)注意納入NSCLC不同分期的病例，同時應(yīng)納入不同的組織分型（包括腺癌、鱗癌、腺鱗癌以及大細(xì)胞癌等）。陽性樣本應(yīng)包括不同突變率的樣本。

臨床試驗(yàn)所用的樣本類型應(yīng)為FFPE樣本。如對于穿刺標(biāo)本及手術(shù)標(biāo)本均適用，則臨床試驗(yàn)中對于兩種標(biāo)本均應(yīng)納入。臨床樣本的處理、保存和核酸提取等應(yīng)分別滿足申報產(chǎn)品說明書及對比試劑說明書的相關(guān)要求。

3.對比方法的選擇

可選擇實(shí)驗(yàn)室參考方法或已上市同類產(chǎn)品作為對比方法。參考方法的檢測可在臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)完成也可委托具有資質(zhì)的第三方機(jī)構(gòu)完成。對比方法的選擇應(yīng)從預(yù)期用途、樣本要求、檢測性能、檢測范圍、所檢突變是否可以分型等方面，確認(rèn)其與申報產(chǎn)品具有較好的可比性。也可以采用多種對比方法來分別進(jìn)行對比。

4.最低樣本量

臨床試驗(yàn)樣本量應(yīng)采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計學(xué)方法進(jìn)行估算，并詳細(xì)描述所使用統(tǒng)計方法及各參數(shù)的確定依據(jù)。此部分臨床試驗(yàn)?zāi)康臑樵u估兩種檢測方法之間的一致性，因此建議采用單組目標(biāo)值法進(jìn)行最低樣本量的估算。通過陽性符合率和陰性符合率來分別計算所需陽性樣本和陰性樣本的例數(shù)，應(yīng)針對每個基因分別進(jìn)行樣本量的估算。

陰、陽性符合率的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)（P0）建議不低于90%。

公式中，n為樣本量；Z1-α/2、Z1-β為顯著性水平和把握度的標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的分?jǐn)?shù)位，P0為評價指標(biāo)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)，PT為申報產(chǎn)品評價指標(biāo)預(yù)期值。

應(yīng)對申報產(chǎn)品所聲稱的每個基因的各種突變均進(jìn)行驗(yàn)證，且每種突變類型均應(yīng)具有一定例數(shù)。對于臨床發(fā)生率較低的突變，可結(jié)合申報產(chǎn)品的檢測原理（如是否共用相同的引物及捕獲探針等）及申報產(chǎn)品的整體檢測性能等綜合考慮。對于融合和插入/缺失，應(yīng)覆蓋常見的變異亞型。

臨床試驗(yàn)總樣本量確定時應(yīng)在上述陰、陽性樣本最低樣本量估算的基礎(chǔ)上，同時考慮其他可能造成受試者脫落的情況以及申報產(chǎn)品所覆蓋的突變位點(diǎn)，根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)增加入組樣本量。

5.統(tǒng)計分析

首先應(yīng)針對所入組人群進(jìn)行人口學(xué)分析，包括性別、年齡、治療狀態(tài)、組織分型、分期、樣本類型（穿刺標(biāo)本或手術(shù)標(biāo)本）、腫瘤細(xì)胞含量、覆蓋所有基因亞組等方面進(jìn)行分析，還應(yīng)分析臨床試驗(yàn)中所納入的陽性判斷值附近的樣本情況。

以四格表分別總結(jié)申報產(chǎn)品與對比方法的定性檢測結(jié)果，計算陽性符合率、陰性符合率及相應(yīng)的95%置信區(qū)間。除總體統(tǒng)計外，還要針對每個基因、每種突變進(jìn)行統(tǒng)計分析，以驗(yàn)證申報產(chǎn)品與對比方法檢測結(jié)果的一致性。

對于融合和插入/缺失，應(yīng)分別統(tǒng)計每種融合或插入/缺失亞型的例數(shù)，常見的變異亞型應(yīng)有一定例數(shù)。

同時應(yīng)針對存在混合突變的樣本單獨(dú)進(jìn)行統(tǒng)計分析。

針對兩種方法檢測不一致樣本，應(yīng)采用合理的方法進(jìn)行確認(rèn)，對不一致的原因綜合進(jìn)行分析。

（二）臨床意義的確認(rèn)

1.具有明確伴隨診斷意義的基因變異

針對具有明確伴隨診斷意義的基因變異，如EGFR （19del、L858R、T790M）、ALK融合、ROS1融合、MET 14外顯子跳躍突變、RET融合、BRAF V600E等，應(yīng)參考伴隨診斷相關(guān)指導(dǎo)原則提供伴隨診斷臨床證據(jù)。申請人應(yīng)關(guān)注國內(nèi)相關(guān)靶點(diǎn)的抗腫瘤藥物的批準(zhǔn)情況，針對國內(nèi)已有相關(guān)抗腫瘤藥物上市的基因變異靶點(diǎn)，應(yīng)提供伴隨診斷臨床證據(jù)。

1.1 一致性比對

針對EGFR、ALK融合、ROS1融合、BRAF V600E，如申報產(chǎn)品為針對已上市的抗腫瘤藥物所開發(fā)的非原研伴隨診斷試劑，則可按照相關(guān)指導(dǎo)原則的要求，采用與原研伴隨診斷試劑進(jìn)行一致性比對的方式開展臨床試驗(yàn)，也可采用指導(dǎo)原則中的其他評價路徑。

1.1.1臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的數(shù)量

針對此部分臨床研究，申請人應(yīng)選擇不少于3家按要求備案的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開展臨床試驗(yàn)。

1.1.2對比方法的選擇

應(yīng)選用申報產(chǎn)品所聲稱伴隨的抗腫瘤藥物的原研伴隨診斷試劑作為對比試劑。應(yīng)注意，申報產(chǎn)品所聲稱的基因變異位點(diǎn)應(yīng)與原研伴隨診斷試劑具有一致性，超出原研伴隨診斷試劑檢測范圍的突變位點(diǎn)不可作為指導(dǎo)用藥的依據(jù)或提供伴隨診斷意義的臨床證據(jù)。

申報產(chǎn)品用于指導(dǎo)用藥的靈敏度應(yīng)與原研伴隨診斷試劑相當(dāng)，根據(jù)原研伴隨診斷試劑的靈敏度水平設(shè)置相應(yīng)的陽性判斷值，以保證兩者具有較好的一致性。

1.1.3入組人群

此部分臨床研究的目的在于評價申報產(chǎn)品的伴隨診斷的預(yù)期用途，因此所入組人群應(yīng)以申報產(chǎn)品所聲稱的伴隨的抗腫瘤藥物的適應(yīng)證人群為主。如藥物的適應(yīng)證人群臨床上較少，客觀上無法實(shí)現(xiàn)，則臨床試驗(yàn)中也應(yīng)包含一部分藥物的適應(yīng)證人群。

1.1.4 樣本量要求

樣本量的估算方法與上述臨床性能評價中的樣本量估算方法相同，根據(jù)與原研伴隨診斷試劑的一致性水平設(shè)置合理的最低可接受標(biāo)準(zhǔn)。如原研伴隨診斷試劑同時能夠滿足對申報產(chǎn)品臨床性能的評價，則此部分研究可與第一部分臨床性能的評價進(jìn)行合并，但應(yīng)注意入組人群的差異。

如采用與原研伴隨診斷試劑的外部等效性研究進(jìn)行伴隨診斷用途的驗(yàn)證，應(yīng)采用合理的統(tǒng)計學(xué)模型進(jìn)行樣本量的估算，樣本量應(yīng)能夠滿足申報產(chǎn)品和原研伴隨診斷試劑檢測結(jié)果之間的符合率非劣效于兩次原研伴隨診斷試劑檢測結(jié)果之間的符合率的要求。應(yīng)注意在統(tǒng)計分析過程中非劣效性界值的確定應(yīng)能夠滿足臨床需求，并提供非劣效界值的確定依據(jù)。

此部分研究中應(yīng)根據(jù)適應(yīng)證人群中的基因突變率納入臨床常見的變異類型。

1.1.5 統(tǒng)計分析

此部分研究的目的在于評價申報產(chǎn)品與原研伴隨診斷試劑在適應(yīng)證人群中篩選人群的一致性，因此除了應(yīng)按照不同突變（如EGFR 19del、L858R）進(jìn)行統(tǒng)計分析外，還應(yīng)對申報產(chǎn)品與原研伴隨診斷試劑對用于篩選人群的生物標(biāo)志物的不同突變匯總統(tǒng)計（EGFR 19del+L858R）。

如伴隨診斷用途的驗(yàn)證采用與原研伴隨診斷試劑進(jìn)行比較的外部等效性研究的評價方法，應(yīng)采用特定的統(tǒng)計學(xué)方法進(jìn)行統(tǒng)計分析，即：評價同時與原研伴隨診斷試劑的第一次檢測結(jié)果相比，申報產(chǎn)品和原研伴隨診斷試劑的第二次檢測結(jié)果的陽性符合率的差值和陰性符合率的差值的95%置信區(qū)間上限是否小于預(yù)先設(shè)定的非劣效界值。

1.2 橋接試驗(yàn)及藥物療效觀察性研究

對于MET 14外顯子跳躍突變、RET融合等目前國內(nèi)已有相應(yīng)的抗腫瘤藥物上市的基因變異，按照伴隨診斷相關(guān)指導(dǎo)原則的要求，目前尚不能進(jìn)行一致性比對的路徑提供伴隨證據(jù)，可選擇橋接試驗(yàn)或藥物療效觀察性研究的路徑進(jìn)行伴隨診斷意義的驗(yàn)證。

1.3 與抗腫瘤藥物同步研發(fā)的伴隨診斷試劑

如申報產(chǎn)品為與新開發(fā)的抗腫瘤藥物同步研發(fā)的伴隨診斷試劑，則可提供與藥物同步開發(fā)的藥物臨床試驗(yàn)資料作為其伴隨診斷證據(jù)。藥物臨床試驗(yàn)報告中應(yīng)明確所使用的伴隨診斷試劑為申報產(chǎn)品，并明確申報產(chǎn)品在藥物臨床試驗(yàn)中所起的作用以及與藥物療效的關(guān)系。

2. 具有臨床意義的基因變異

基于NGS方法的檢測能力及技術(shù)特點(diǎn)，對于尚不是伴隨診斷的基因變異位點(diǎn)，但經(jīng)臨床診療指南公認(rèn)為具有臨床意義的基因變異亦可以納入其檢測范圍。

針對此類基因變異，對于有已上市同類產(chǎn)品的，無需提供其臨床意義的證據(jù)。如尚無已上市同類產(chǎn)品的，申請人應(yīng)提供針對NSCLC患者的臨床診療指南等臨床公認(rèn)的相關(guān)資料作為該類基因變異位點(diǎn)臨床意義的支持性資料。

（三）通用要求

1.臨床試驗(yàn)方案

臨床試驗(yàn)實(shí)施前，研究人員應(yīng)從流行病學(xué)、統(tǒng)計學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)等多方面考慮，設(shè)計科學(xué)合理的臨床試驗(yàn)方案。各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)執(zhí)行同一臨床試驗(yàn)方案，且保證在整個臨床試驗(yàn)過程中遵循預(yù)定的方案實(shí)施，不可隨意改動。整個試驗(yàn)過程應(yīng)在臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申請人的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，尤其是數(shù)據(jù)收集過程。

試驗(yàn)方案中應(yīng)確定嚴(yán)格的病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已經(jīng)入選的病例再被剔除出臨床試驗(yàn)都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗(yàn)操作過程中和判定試驗(yàn)結(jié)果時應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。

2.質(zhì)量控制

臨床試驗(yàn)開始前，建議進(jìn)行臨床試驗(yàn)方案的培訓(xùn)，以熟悉并掌握相關(guān)試驗(yàn)方法的操作、儀器、技術(shù)性能等，最大限度控制試驗(yàn)誤差。整個試驗(yàn)過程都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

3.臨床試驗(yàn)報告

臨床試驗(yàn)報告應(yīng)該對試驗(yàn)的整體設(shè)計及各個關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對整個臨床試驗(yàn)實(shí)施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計分析方法，最后得出臨床試驗(yàn)結(jié)論。臨床試驗(yàn)報告的撰寫應(yīng)參考相關(guān)法規(guī)的要求。

報告中應(yīng)明確所配套使用的測序儀、生物信息數(shù)據(jù)分析軟件、測序試劑等具體信息。

數(shù)據(jù)匯總表中應(yīng)提供唯一可溯源的樣本編號、基本人口學(xué)信息（性別、年齡等）、臨床診斷背景信息、腫瘤的組織分型、分期、組織樣本腫瘤細(xì)胞占比、突變類型、突變頻率、測序深度、覆蓋該位點(diǎn)的整個測序深度的測序數(shù)據(jù)（reads數(shù)）、申報產(chǎn)品及對比方法的檢測結(jié)果等信息。

委托第三方機(jī)構(gòu)進(jìn)行參考方法檢測的，應(yīng)提供臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)委托第三方機(jī)構(gòu)的委托協(xié)議。同時應(yīng)提供參考方法的詳細(xì)資料，如：方法原理、所需試劑及儀器、參考方法的性能驗(yàn)證、參考方法質(zhì)控、典型的實(shí)驗(yàn)圖譜及數(shù)據(jù)等。上述資料應(yīng)由臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)簽章確認(rèn)。

三、參考文獻(xiàn)

[1] NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology (NCCN Guidelines?) Non-Small Cell Lung Cancer, Version 3.2023.

[2]中國臨床腫瘤學(xué)會（CSCO）非小細(xì)胞肺癌診療指南 2023.

[3]中國臨床腫瘤學(xué)會非小細(xì)胞肺癌專家委員會，二代測序技術(shù)在NSCLC中的臨床應(yīng)用中國專家共識（2020版）[J].中國肺癌雜志,2020,23(9):741-761.

[4]中華醫(yī)學(xué)會病理學(xué)分會等，非小細(xì)胞肺癌分子病理檢測臨床實(shí)踐指南（2021版）[J].中華病理學(xué)雜志,2021,50(4):323-332.

[5]國家藥品監(jiān)督管理局.抗腫瘤藥物的非原研伴隨診斷試劑臨床試驗(yàn)注冊審查指導(dǎo)原則:國家藥監(jiān)局通告2021年第95號[Z].

[6]國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心.與抗腫瘤藥物同步研發(fā)的原研伴隨診斷試劑臨床試驗(yàn)注冊審查指導(dǎo)原則:國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心2022年第28號[Z].

附件

關(guān)于基于高通量測序技術(shù)的非小細(xì)胞肺癌

相關(guān)基因變異檢測試劑的背景介紹

基于高通量測序（high-throughput sequencing）即下一代測序（next generation sequencing，NGS）的技術(shù)，檢測腫瘤組織中的基因變異，正在廣泛用于腫瘤診療相關(guān)領(lǐng)域。腫瘤基因變異類型包括點(diǎn)突變、插入、缺失、基因重排、拷貝數(shù)異常等。尤其精準(zhǔn)醫(yī)療的蓬勃發(fā)展，在抗腫瘤藥物的伴隨診斷領(lǐng)域也起到了至關(guān)重要的作用。

肺癌是我國發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤，按照病理學(xué)分類，可分為非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）和小細(xì)胞肺癌（small cell lung cancer, SCLC）兩種類型，其中NSCLC是最為常見的組織學(xué)類型，約占85%。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，對于NSCLC的認(rèn)識已經(jīng)從組織水平發(fā)展到了分子水平，越來越多的腫瘤相關(guān)基因變異被發(fā)現(xiàn)，基于基因變異的靶向治療在NSCLC的抗腫瘤治療中起到了顯著的臨床效果。目前在NSCLC中的腫瘤相關(guān)突變基因主要有以下基因：

EGFR：人表皮生長因子受體（Epidermal Growth Factor Receptor，EGFR）突變是NSCLC驅(qū)動基因研究中最早發(fā)現(xiàn)的基因變異，也是NSCLC中最常見的驅(qū)動基因變異。EGFR是一種跨膜酪氨酸激酶受體，該受體激酶域激活與癌細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移和凋亡等多種信號傳導(dǎo)通路有關(guān)。EGFR突變率在亞洲人群晚期肺腺癌患者中的發(fā)生率高達(dá)50%，該基因的常見突變位點(diǎn)發(fā)生在18號～21號外顯子上，其中最常見的是19號外顯子缺失突變（19del）以及21號外顯子L858點(diǎn)突變（L858R），這兩種突變占比約為90%，均為EGFR酪氨酸激酶抑制劑（Tyrosine Kinase Inhibitor，TKI）敏感型突變。20號外顯子上的T790M替代突變?yōu)橐淮鶷KI的耐藥突變。此外，還有許多類型的突變臨床意義尚不明確。

ALK：間變性淋巴瘤激酶（Anaplastic Lymphoma Kinase, ALK）基因融合在NSCLC中的發(fā)生率約為5%~10%，其中EML4是最常見的ALK融合伴侶，占ALK 重排的90%~95%。EML4-ALK又分為多個亞型，其中V1型（E13:A20）和V3型（E6:A20）占比最高，約占EML4-ALK融合突變的75%~80%，其次為V2型（E20:A20），其他EML4-ALK融合亞型則較為少見（占比均不足10%）。ALK靶向抑制劑對ALK基因融合陽性的晚期NSCLC患者具有顯著療效。除EML4這一最常見的融合伴侶外，研究還發(fā)現(xiàn)KIF5B、TFG、KLC1、SOCS5、HIP1、TPR、BIRC6等多種罕見的ALK融合伴侶，這些罕見的融合并未有充分的藥物研究。

ROS1：ROS1位于人類6號染色體長臂上，全稱c-ros原癌基因，是跨膜酪氨酸激酶受體家族成員之一。發(fā)生融合的ROS1蛋白失去了大部分細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域，不需要配體結(jié)合便可被持續(xù)激活，導(dǎo)致下游信號通路功能異常。ROS1融合在NSCLC中的發(fā)生率約為2%，重排位點(diǎn)主要發(fā)生在32號~36號外顯子，最常見的ROS1融合伴侶是CD74、SLC34A2、CCDC6和FIG。臨床上作為克唑替尼等藥物的檢測靶點(diǎn)。

MET：c-MET為一種表達(dá)于上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞表面的受體酪氨酸激酶，可被其配體干細(xì)胞生長因子（HGF）激活，在腫瘤細(xì)胞的生長、增殖、侵襲及抑制細(xì)胞凋亡方面發(fā)揮重要作用。c-MET通路異常激活主要包括MET 14號外顯子跳躍突變、MET擴(kuò)增和MET蛋白過表達(dá)3種類型。目前已有針對MET 14號外顯子跳躍突變晚期NSCLC患者的靶向藥物獲得批準(zhǔn)，并且有多個新藥已處于臨床研究階段。

RET：RET原癌基因位于第10號染色體長臂，編碼一種具有酪氨酸激酶活性的單次跨膜糖蛋白受體。RET激酶受體可通過細(xì)胞內(nèi)酪氨酸殘基的自磷酸化激活，觸發(fā)包括RAS-MARK、PI3K-AKT、JAK-STAT等于細(xì)胞增殖及存活相關(guān)的信號通路。RET基因變異主要有兩種形式，點(diǎn)突變及基因融合。RET基因融合常見于NSCLC，在NSCLC中的發(fā)生率約為1.4%~2.5%，其中KIF5B-RET為最常見的RET融合，約占68.3%，其次為CCDC6-RET（16.8%）、NCOA4-RET（1.2%）。RET融合基因?yàn)榘邢蛩幬锏难邪l(fā)提供了靶點(diǎn)，目前國內(nèi)已有針對NSCLC的RET抑制劑獲批上市。

BRAF：BRAF突變可導(dǎo)致MAPK/ERK信號通路異?；罨?，在NSCLC中突變頻率為1%~2%，常見突變位型為V600E，約占50%以上。目前國內(nèi)已有針對NSCLC的BRAF抑制劑獲批上市。

KRAS：KRAS在亞洲人群中突變率為8%~10%，突變位點(diǎn)位于2號及3號外顯子。研究表明，由于重疊靶向變異的可能性較低，KRAS中存在已知激活突變可以幫助識別出不太可能因進(jìn)一步分子檢測受益的患者。

ERBB2（HER2）：HER2是酪氨酸激酶受體ERBB家族成員之一，在NSCLC中最常見的突變是20號外顯子插入突變，在NSCLC中的突變率為2%~4%。研究顯示，小分子TKI對HER2突變型的晚期NSCLC患者的療效不佳。

基于NGS技術(shù)高通量的特點(diǎn)，并且可檢測的變異類型多樣, 隨著研究的深入，會有越來越多的具有臨床意義的基因變異被發(fā)現(xiàn)。目前在NCCN及我國相關(guān)非小細(xì)胞肺癌診療指南中推薦檢測的主要為以上基因變異，考慮到中國NSCLC患者特有的基因變異頻率、藥物在中國的獲批適應(yīng)證及藥物可及性，CSCO NSCLC診療指南（2023）中對不可手術(shù)的晚期NSCLC患者，檢測分子標(biāo)志物EGFR突變、ALK融合、ROS1融合、RET融合、MET 14外顯子跳躍突變、BRAF V600突變、NTRK融合作為Ⅰ級推薦。相關(guān)的專家共識中亦建議至少應(yīng)同時檢測EGFR突變、ALK融合和ROS1融合三種形式的基因變異。