附件：呼吸道病毒多重核酸檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2019年第80號(hào)）.doc

呼吸道病毒多重核酸檢測(cè)試劑注冊(cè)技術(shù)
審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)呼吸道病毒多重核酸檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫(xiě)，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門(mén)審評(píng)注冊(cè)申報(bào)資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是對(duì)呼吸道病毒多重核酸測(cè)定試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。如申請(qǐng)人認(rèn)為有必要增加本指導(dǎo)原則未包含的研究?jī)?nèi)容，可自行補(bǔ)充。

如果申報(bào)產(chǎn)品檢測(cè)項(xiàng)目包括的病毒有相應(yīng)的指導(dǎo)原則，應(yīng)首先滿(mǎn)足指導(dǎo)原則要求的內(nèi)容。

本指導(dǎo)原則是供申請(qǐng)人和審查人員使用的指導(dǎo)文件，不涉及注冊(cè)審批等行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如有能夠滿(mǎn)足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

呼吸道感染（Respiratory tract infection，RTI）是人類(lèi)最常見(jiàn)的一類(lèi)疾病，可以在任何性別、年齡和地域中發(fā)生，是全球范圍內(nèi)引起人群發(fā)病和死亡的最主要原因之一。呼吸道感染引起的臨床癥狀和體征都較為相似，其臨床表現(xiàn)主要為鼻炎、咽炎、喉炎、扁桃體炎等癥狀，嚴(yán)重的可引起氣管炎、支氣管炎及肺炎等，但不同病原體引起的感染，其治療方法、療效和病程也不盡相同。目前已證明，大部分呼吸道疾病是由細(xì)菌外的病原體引起，其中以呼吸道病毒最常見(jiàn)。

本指導(dǎo)原則適用于呼吸道病毒多重核酸檢測(cè)試劑，適用樣本類(lèi)型為鼻咽拭子、鼻拭子、咽拭子、肺泡灌洗液、痰液或其他呼吸道分泌物樣本等，可包括但不限于：

甲型流感病毒（Influenza A，IFV A）、乙型流感病毒（Influenza B，IFV B）、呼吸道合胞病毒（Respiratory Syncytial Virus，RSV）、副流感病毒(Parainfluenza Virus，PIV)、人偏肺病毒（Human Metapneumovirus，hMPV）、腺病毒（Adenovirus，Adv）、呼吸道感染腸道病毒（腸道病毒/鼻病毒）（Enterovirus，EV/ Rhinovirus， RhV）、冠狀病毒（Coronavirus，CoV）等。

本指導(dǎo)原則適用于利用熒光探針聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Real-time PCR）或其他分子生物學(xué)方法，以特定的呼吸道病毒基因序列為檢測(cè)目標(biāo)，對(duì)來(lái)源于人體樣本中的呼吸道病毒核酸進(jìn)行體外定性檢測(cè)，臨床用于輔助診斷呼吸道病毒感染相關(guān)性疾病。涉及其他臨床用途的呼吸道病原體核酸檢測(cè)試劑可參考本指導(dǎo)原則。

二、注冊(cè)申報(bào)資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說(shuō)明、有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評(píng)價(jià)以及其他內(nèi)容，其中的其他內(nèi)容包括同類(lèi)產(chǎn)品在國(guó)內(nèi)外批準(zhǔn)上市情況。與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥應(yīng)重點(diǎn)描述呼吸道病毒型別與臨床適應(yīng)癥的相關(guān)性及相關(guān)病毒在我國(guó)的流行特征；產(chǎn)品描述應(yīng)明確申報(bào)產(chǎn)品所有可檢出的病毒型別、尚未驗(yàn)證的病毒型別，陳述應(yīng)科學(xué)、客觀且有依據(jù)；與國(guó)內(nèi)外同類(lèi)產(chǎn)品的比較內(nèi)容應(yīng)著重從方法學(xué)、病毒種類(lèi)及基因型檢出能力、檢出限等方面進(jìn)行比較。應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號(hào)）和《體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求及說(shuō)明》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號(hào)）的相關(guān)要求。

（二）主要原材料的研究資料

此類(lèi)產(chǎn)品的主要原材料包括引物、探針、酶、dNTP、核酸分離/純化組分（如有）、企業(yè)參考品、質(zhì)控品等。應(yīng)提供主要原材料的選擇與來(lái)源、制備過(guò)程、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)等相關(guān)研究資料、質(zhì)控品的定值試驗(yàn)資料等。如主要原材料為企業(yè)自制，應(yīng)提供其詳細(xì)制備過(guò)程；如主要原材料源于外購(gòu)，應(yīng)提供資料包括：選擇該原材料的依據(jù)及對(duì)比試驗(yàn)資料、供貨方提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢定報(bào)告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗(yàn)資料。

1.引物和探針：應(yīng)詳述引物和探針的設(shè)計(jì)原則，提供引物、探針核酸序列、模板核酸序列及兩者的對(duì)應(yīng)情況。建議每種病毒設(shè)計(jì)兩套或多套引物、探針以供篩選，針對(duì)所有預(yù)期適用的病毒種類(lèi)及基因型別進(jìn)行檢出能力和特異性（如交叉反應(yīng)）的評(píng)價(jià)，選擇最佳組合，并提交篩選的研究數(shù)據(jù)。引物、探針的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)至少包括序列準(zhǔn)確性、純度、濃度及功能性實(shí)驗(yàn)等。

如為外購(gòu)，引物和探針應(yīng)提供合成機(jī)構(gòu)出具的質(zhì)檢證明，如純度（應(yīng)達(dá)到電泳級(jí)或HPLC級(jí)）、序列準(zhǔn)確性等，申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)引物、探針核酸序列準(zhǔn)確性、純度、濃度、探針標(biāo)記的熒光素或化學(xué)發(fā)光物等進(jìn)行核實(shí)，同時(shí)申請(qǐng)人應(yīng)進(jìn)行功能性驗(yàn)證，并提供相關(guān)資料。

2.脫氧三磷酸核苷（dNTP）：包括dATP、dUTP、dGTP、dCTP、dTTP，應(yīng)提供對(duì)其純度、濃度、功能性等的詳細(xì)驗(yàn)證資料。

3.酶：需要的酶主要包括DNA聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶、尿嘧啶DNA糖基化酶等，應(yīng)分別對(duì)酶活性、功能性等進(jìn)行評(píng)價(jià)和驗(yàn)證。DNA聚合酶，應(yīng)具有DNA聚合酶活性，無(wú)核酸內(nèi)切酶活性，具熱穩(wěn)定性；逆轉(zhuǎn)錄酶，具逆轉(zhuǎn)錄酶活性，無(wú)核酸內(nèi)切酶活性；尿嘧啶DNA糖基化酶（UNG），應(yīng)對(duì)酶活性及熱穩(wěn)定性有合理驗(yàn)證。

4.試劑盒內(nèi)質(zhì)控品

試劑盒的質(zhì)控體系通過(guò)設(shè)置各種試劑盒對(duì)照品（質(zhì)控品）來(lái)實(shí)現(xiàn)，其參與樣本核酸的平行提取，以對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)過(guò)程、試劑/設(shè)備、交叉污染等環(huán)節(jié)進(jìn)行合理質(zhì)量控制。質(zhì)控品濃度及成分的設(shè)置應(yīng)與待測(cè)樣本相近。申報(bào)資料應(yīng)對(duì)試劑盒對(duì)照品有關(guān)原料選擇、制備、定值過(guò)程、濃度范圍等試驗(yàn)資料詳細(xì)說(shuō)明。

4.1陰性質(zhì)控品應(yīng)不含試劑盒所檢測(cè)的靶序列，應(yīng)參與樣本處理和檢測(cè)的全過(guò)程。以對(duì)可能存在的交叉污染產(chǎn)生的假陽(yáng)性結(jié)果或擴(kuò)增反應(yīng)中背景值進(jìn)行質(zhì)量控制。陰性質(zhì)控品可來(lái)自非呼吸道病毒感染患者樣本、假病毒、含非靶向序列的生物樣本。建議采用與實(shí)際檢測(cè)樣本具有相同或相似性狀的基質(zhì)溶液作為陰性對(duì)照（質(zhì)控）品，不推薦采用水作為陰性對(duì)照（質(zhì)控）品。

4.2陽(yáng)性質(zhì)控品

4.2.1全過(guò)程陽(yáng)性質(zhì)控品應(yīng)參與樣本處理和檢測(cè)的全過(guò)程，如核酸的平行提取等步驟。全過(guò)程陽(yáng)性質(zhì)控品可用1～2個(gè)病毒株為代表，應(yīng)含有天然的或人工合成的包含試劑盒可檢測(cè)靶序列，可來(lái)自滅活病毒、假病毒、疫苗株等。企業(yè)應(yīng)對(duì)質(zhì)控品的檢測(cè)結(jié)果（如Ct值）做出明確的范圍要求。

4.2.2擴(kuò)增/檢測(cè)用陽(yáng)性對(duì)照品（如有）可為濃度在最低檢出限附近的純化靶核酸，以對(duì)檢測(cè)過(guò)程進(jìn)行質(zhì)量控制。

4.3內(nèi)對(duì)照（內(nèi)標(biāo)）可以對(duì)管內(nèi)抑制導(dǎo)致的假陰性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制，應(yīng)與靶核酸一同提取及擴(kuò)增，申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)內(nèi)對(duì)照（內(nèi)標(biāo)）的引物、探針設(shè)計(jì)和模板濃度做精確驗(yàn)證，既要保證內(nèi)標(biāo)熒光通道呈明顯的陽(yáng)性曲線(xiàn)又要盡量降低對(duì)靶基因檢測(cè)造成的抑制。對(duì)內(nèi)對(duì)照的檢測(cè)結(jié)果（如Ct值）亦應(yīng)做出明確的范圍要求。內(nèi)標(biāo)可設(shè)置為與待測(cè)病毒共提取的人核酸、人管家基因（如RNaseP、β-肌動(dòng)蛋白）或人工合成的外源片段。

5.企業(yè)參考品：應(yīng)詳細(xì)提供有關(guān)企業(yè)參考品的原料選擇、制備、陰陽(yáng)性確認(rèn)等試驗(yàn)資料。企業(yè)參考品的核酸性質(zhì)應(yīng)與產(chǎn)品預(yù)期檢測(cè)的靶物質(zhì)一致。建議企業(yè)參考品優(yōu)先采用病毒培養(yǎng)物，如病毒難以培養(yǎng)，可采用假病毒、病毒株感染的細(xì)胞系等。

5.1陽(yáng)性參考品和陰性參考品

陽(yáng)性參考品應(yīng)覆蓋申報(bào)產(chǎn)品聲稱(chēng)可檢出的主要呼吸道病毒亞型（詳見(jiàn)表1）。陰性參考品應(yīng)考慮檢測(cè)特異性的評(píng)價(jià)，應(yīng)納入不在試劑盒檢測(cè)范圍內(nèi)、易引發(fā)相似癥狀的其他呼吸道病原體樣品。

5.2檢測(cè)限參考品

申請(qǐng)人應(yīng)明確檢測(cè)限參考品中病毒核酸濃度的確定方法，明確檢測(cè)限參考品中病毒核酸濃度的確定依據(jù)，檢測(cè)限參考品中呼吸道病毒核酸濃度應(yīng)為申報(bào)產(chǎn)品檢測(cè)限濃度或略高于檢測(cè)限濃度，檢測(cè)限參考品應(yīng)包含申報(bào)產(chǎn)品可檢出的呼吸道病毒主要亞型（詳見(jiàn)表1）。

5.3精密度參考品

可不包含所有涉及的呼吸道病毒亞型，但應(yīng)選擇多個(gè)臨床較常見(jiàn)的型別，針對(duì)所選型別應(yīng)至少包含3個(gè)水平：陰性水平、臨界陽(yáng)性水平、（中或強(qiáng)）陽(yáng)性水平。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

1.介紹產(chǎn)品主要生產(chǎn)工藝，可用圖表方式表示，并說(shuō)明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。

2.反應(yīng)原理介紹。

3.詳述樣本采集、樣本處理方式的選擇和設(shè)置，提供相關(guān)的研究資料。

4.確定最佳反應(yīng)體系的研究資料，包括樣本用量、各種酶濃度、引物/探針濃度、dNTP濃度、陽(yáng)離子濃度及反應(yīng)各階段溫度、時(shí)間、循環(huán)數(shù)等。

5.不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述，并提交驗(yàn)證資料。

6.如申報(bào)產(chǎn)品包含核酸分離/純化試劑，應(yīng)提交對(duì)核酸分離/純化過(guò)程進(jìn)行工藝優(yōu)化的研究資料。

（四）分析性能評(píng)估資料

申請(qǐng)人應(yīng)提交生產(chǎn)者在產(chǎn)品研制階段對(duì)試劑盒進(jìn)行的所有性能評(píng)價(jià)的研究資料，對(duì)于每項(xiàng)分析性能的評(píng)價(jià)都應(yīng)包括具體研究目的、試驗(yàn)方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)方法等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能驗(yàn)證的背景信息也應(yīng)在申報(bào)資料中有所體現(xiàn)，包括實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)、適用儀器、試劑規(guī)格、批號(hào)、臨床樣本來(lái)源等。

針對(duì)不同的樣本類(lèi)型，申請(qǐng)人應(yīng)分別完成性能評(píng)估，包括陰陽(yáng)性符合率、最低檢測(cè)限、精密度、分析特異性等。

分析性能評(píng)價(jià)的試驗(yàn)方法可以參考國(guó)際或國(guó)內(nèi)有關(guān)體外診斷試劑性能評(píng)估的指導(dǎo)原則進(jìn)行。對(duì)于此類(lèi)產(chǎn)品，性能評(píng)估中所用樣品（除非特別說(shuō)明）可參考上述企業(yè)參考品的制備要求。各項(xiàng)性能評(píng)價(jià)應(yīng)符合以下要求：

1.核酸分離/純化性能

在進(jìn)行靶核酸檢測(cè)前，應(yīng)有適當(dāng)?shù)暮怂岱蛛x/純化步驟。該步驟的目的除最大量分離出目的核酸外，還應(yīng)有相應(yīng)的純化作用，盡可能去除PCR抑制物。無(wú)論檢測(cè)試劑是否含有核酸分離/純化的組分，企業(yè)都應(yīng)結(jié)合檢測(cè)試劑的特性，對(duì)配合使用的核酸分離/純化試劑的提取效率、提取核酸純度等做充分的驗(yàn)證，提供詳細(xì)的驗(yàn)證資料。

2.陽(yáng)/陰性參考品符合率

陽(yáng)性參考品的檢測(cè)旨在驗(yàn)證試劑盒檢測(cè)范圍內(nèi)的各呼吸道病毒主要亞型均可被檢測(cè)到，陽(yáng)性參考品檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性。陰性參考品旨在評(píng)價(jià)試劑特異性，陰性參考品檢測(cè)結(jié)果應(yīng)為陰性。

3.最低檢出限

申報(bào)產(chǎn)品最低檢測(cè)限的性能評(píng)估資料應(yīng)包含最低檢測(cè)限的確定及驗(yàn)證過(guò)程。

病毒原液濃度測(cè)定建議采用空斑形成單位（PFU）或半數(shù)組織培養(yǎng)感染/致死劑量（TCID50）為計(jì)量單位（最低檢出限建議的病毒亞型見(jiàn)表1）。建議建立PFU/TCID50與拷貝數(shù)之間的關(guān)系。

企業(yè)應(yīng)能夠提供用于最低檢出限驗(yàn)證的病毒株的來(lái)源、型別確認(rèn)及滴度確認(rèn)試驗(yàn)等信息。

用于最低檢測(cè)限確定和驗(yàn)證的病毒株如包括疫苗株，其應(yīng)能夠體現(xiàn)發(fā)病季的病毒特點(diǎn)。

3.1最低檢測(cè)限的確定

應(yīng)針對(duì)申報(bào)產(chǎn)品所能檢出的主要呼吸道病毒亞型分別進(jìn)行確定。在進(jìn)行最低檢測(cè)限的確定時(shí)，參與研究的病毒各亞型應(yīng)至少包括不同來(lái)源的2個(gè)具有代表性的病毒株的系列稀釋梯度。建議采用培養(yǎng)后病毒原液、以混合陰性樣本基質(zhì)作為稀釋液進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)y以培養(yǎng)的病毒也可采用假病毒或其他適宜方法進(jìn)行最低檢出限的確定。配制系列稀釋的樣品每個(gè)稀釋度上重復(fù)制備3～5份樣本，系列稀釋度應(yīng)能夠覆蓋大部分檢出概率區(qū)間（0～100%），可通過(guò)概率計(jì)算或其他適當(dāng)方法進(jìn)行測(cè)算選取適當(dāng)檢出率水平的濃度作為最低檢測(cè)限確定的標(biāo)準(zhǔn)，如90-95%（n≥20）的陽(yáng)性檢出率水平。

通過(guò)另制備至少5份最低檢測(cè)限濃度水平的病毒稀釋液對(duì)90%～95%的檢出率進(jìn)行確認(rèn)。

3.2最低檢測(cè)限的驗(yàn)證

申報(bào)試劑應(yīng)在最低檢出限或接近最低檢出限的病毒濃度、對(duì)每種常見(jiàn)待測(cè)病毒亞型具有時(shí)間和區(qū)域特征性的至少3個(gè)不同來(lái)源的病毒（病毒株或臨床樣本）進(jìn)行驗(yàn)證，總測(cè)試數(shù)不少于20次。

4.包容性驗(yàn)證

建議申請(qǐng)人在病毒LoD水平上或附近對(duì)聲稱(chēng)樣本進(jìn)行分析，證明試驗(yàn)?zāi)軌驒z測(cè)代表時(shí)間和地理多樣性的、每種病毒主要亞型至少3個(gè)不同來(lái)源的臨床樣本（推薦病毒亞型見(jiàn)表1）。包容性驗(yàn)證所用臨床樣本與最低檢測(cè)限驗(yàn)證的樣本不能重復(fù)使用。

企業(yè)應(yīng)能夠提供用于包容性驗(yàn)證的病毒株的來(lái)源、型別確認(rèn)、滴度確定等信息。

5.干擾試驗(yàn)（分析特異性）

在本項(xiàng)試驗(yàn)中，申請(qǐng)人應(yīng)充分評(píng)估整個(gè)系統(tǒng)即從核酸提取到擴(kuò)增的全過(guò)程的分析特異性。用于分析特異性驗(yàn)證的樣本應(yīng)使用聲稱(chēng)的樣本類(lèi)型基質(zhì)，并包括每種申報(bào)的樣本類(lèi)型。

5.1內(nèi)源/外源物質(zhì)干擾

應(yīng)根據(jù)所采集樣本類(lèi)型，針對(duì)可能存在的干擾情況進(jìn)行驗(yàn)證。建議申請(qǐng)人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下進(jìn)行評(píng)價(jià)，并針對(duì)有代表性的呼吸道病毒亞型，在病毒臨界陽(yáng)性水平進(jìn)行干擾試驗(yàn)驗(yàn)證。檢測(cè)的潛在干擾物包括樣本中的原有物質(zhì)（如血液、鼻腔分泌物或粘膜，及用于緩解淤血、鼻噪、刺激或哮喘和過(guò)敏癥狀的鼻腔和咽喉藥物）及在樣本采集和制備期間引入的物質(zhì)（推薦用于干擾性試驗(yàn)的物質(zhì)見(jiàn)表2）。由于體外試驗(yàn)不一定能完全反映藥物影響，在適用情況下可考慮替代性試驗(yàn)如評(píng)估臨床實(shí)驗(yàn)中所納入患者的用藥影響，因此申請(qǐng)人也應(yīng)評(píng)估其他常規(guī)或非處方藥物及其代謝物。

5.2競(jìng)爭(zhēng)性干擾

申請(qǐng)人應(yīng)充分考慮臨床上常見(jiàn)的呼吸道病毒混合感染情況下（如甲型流感病毒與呼吸道合胞病毒），高濃度分析物對(duì)低濃度分析物檢測(cè)的影響。建議申請(qǐng)人結(jié)合申報(bào)試劑的反應(yīng)模式，使用一種最低檢測(cè)限濃度的分析物和一種高濃度分析物評(píng)估競(jìng)爭(zhēng)性干擾，競(jìng)爭(zhēng)性感染的病毒組合建議為同一反應(yīng)體系內(nèi)病毒、常見(jiàn)重癥感染病毒及常見(jiàn)混合感染病毒（如IFV A和RhV、IFV B和RhV、IFV A和PIV、EV和RhV、PIV和HRV、以及其他的多重感染等）。競(jìng)爭(zhēng)性干擾試驗(yàn)可與最低檢測(cè)限、重復(fù)性或其他干擾試驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行。

6.交叉反應(yīng)

6.1與試劑盒中其他病毒的交叉反應(yīng)性

建議申請(qǐng)人充分驗(yàn)證試劑盒中可檢測(cè)病毒及亞型之間的交叉反應(yīng)性，應(yīng)使用病毒最高臨床水平濃度進(jìn)行。

6.2與不在試劑盒檢測(cè)范圍中的病原體的交叉反應(yīng)性

申請(qǐng)人應(yīng)針對(duì)可能出現(xiàn)在檢測(cè)樣本中的病原體（如采樣部位常見(jiàn)微生物、其他呼吸道感染病原體等）進(jìn)行交叉反應(yīng)驗(yàn)證。用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的樣品，應(yīng)盡量采用滅活病原體或臨床樣本。建議在病毒和細(xì)菌感染的醫(yī)學(xué)相關(guān)水平進(jìn)行交叉反應(yīng)的驗(yàn)證，申請(qǐng)人應(yīng)詳細(xì)說(shuō)明交叉反應(yīng)樣本來(lái)源、病原體鑒定和滴度確定的方法和結(jié)果。病原體種類(lèi)主要考慮以下幾方面：試劑盒檢測(cè)范圍以外的其他呼吸道病原體、感染人群呼吸道樣本中的其他微生物（如EBV和CMV）、樣本中可能出現(xiàn)的其他病原體。

7.精密度

企業(yè)應(yīng)對(duì)精密度指標(biāo)，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)等的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求。模擬樣本并不能體現(xiàn)臨床樣本可能帶來(lái)的所有變異因素，因此精密度評(píng)價(jià)中應(yīng)同時(shí)包含若干臨床樣本，且精密度評(píng)價(jià)試驗(yàn)應(yīng)包含核酸分離/純化步驟。針對(duì)本類(lèi)產(chǎn)品的精密度評(píng)價(jià)主要包括以下要求。

7.1對(duì)可能影響檢測(cè)精密度的主要變量進(jìn)行驗(yàn)證，除檢測(cè)試劑（包括核酸分離/純化組分）本身的影響外，還應(yīng)對(duì)分析儀、操作者、地點(diǎn)、檢測(cè)輪次等要素進(jìn)行相關(guān)的驗(yàn)證。

7.2設(shè)定合理的精密度評(píng)價(jià)周期，例如：為期至少20天的檢測(cè)，每天至少由2人完成不少于2次的完整檢測(cè)，從而對(duì)批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。

7.3用于精密度評(píng)價(jià)的人工模擬樣品和臨床樣本均應(yīng)至少包含3個(gè)水平：陰性樣品、臨界陽(yáng)性樣品、（中或強(qiáng)）陽(yáng)性樣品，并根據(jù)產(chǎn)品特性設(shè)定適當(dāng)?shù)木芏纫?，臨床樣本精密度評(píng)價(jià)中的每一次檢測(cè)均應(yīng)從核酸提取開(kāi)始。

7.3.1陰性樣本：待測(cè)物濃度低于最低檢測(cè)限或?yàn)榱銤舛?，陰性檢出率應(yīng)≥95%（n≥20）。

7.3.2臨界陽(yáng)性樣本：待測(cè)物濃度略高于試劑盒的最低檢測(cè)限，陽(yáng)性檢出率應(yīng)≥95%（n≥20）。

7.3.3中/強(qiáng)陽(yáng)性樣本：待測(cè)物濃度呈中度到強(qiáng)陽(yáng)性，陽(yáng)性檢出率為100%且CV≤10%（n≥20）。

（五）陽(yáng)性判斷值確定資料

陽(yáng)性判斷值確定資料主要指對(duì)每種聲稱(chēng)可檢出的病毒核酸檢測(cè)的Ct值進(jìn)行確認(rèn)，建議申請(qǐng)人對(duì)申報(bào)產(chǎn)品用于結(jié)果判斷的臨界值予以確認(rèn)。陽(yáng)性判斷值研究資料樣本來(lái)源應(yīng)考慮不同年齡、性別、地域等因素，盡可能考慮樣本來(lái)源的多樣性、代表性。如存在判定值灰區(qū)，應(yīng)提供灰區(qū)的確認(rèn)資料。如采用其他方法對(duì)陽(yáng)性判斷值進(jìn)行確認(rèn)研究，應(yīng)說(shuō)明這種方法的合理性。提供內(nèi)標(biāo)值的確定方法和研究資料。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（有效期）、開(kāi)瓶穩(wěn)定性及凍融次數(shù)限制等研究，申請(qǐng)人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對(duì)于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

考慮到病毒RNA極易被降解的特性，企業(yè)也應(yīng)對(duì)樣本穩(wěn)定性進(jìn)行研究，主要包括冷藏和冷凍兩種條件下的有效期驗(yàn)證，可以在合理的溫度范圍內(nèi)，每間隔一定的時(shí)間段即對(duì)儲(chǔ)存樣本進(jìn)行驗(yàn)證，從而確認(rèn)不同類(lèi)型樣本的效期穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對(duì)凍融次數(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)。

對(duì)于樣本提取后不能立即進(jìn)行檢測(cè)的，應(yīng)明確核酸儲(chǔ)存條件、儲(chǔ)存時(shí)間等，同時(shí)應(yīng)提供相應(yīng)的核酸穩(wěn)定性研究資料。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性?xún)刹糠謨?nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說(shuō)明書(shū)【儲(chǔ)存條件及有效期】和【樣本要求】?jī)身?xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。

（七）臨床評(píng)價(jià)資料

臨床試驗(yàn)的開(kāi)展、方案的制定以及報(bào)告的撰寫(xiě)等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第16號(hào)）的要求。臨床試驗(yàn)應(yīng)能檢出所有聲稱(chēng)可檢出的呼吸道病毒，每種呼吸道病毒檢測(cè)陽(yáng)性例數(shù)可采用統(tǒng)計(jì)方法進(jìn)行計(jì)算，建議每種罕見(jiàn)病毒類(lèi)型的陽(yáng)性樣本例數(shù)不少于50例，每種病毒類(lèi)型的陽(yáng)性例數(shù)在滿(mǎn)足最低例數(shù)要求的基礎(chǔ)上還應(yīng)符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，方案中需要給出明確的樣本量確定依據(jù)，如每種病毒類(lèi)型與對(duì)照方法的檢測(cè)陽(yáng)性一致率95%的置信區(qū)間下限>90%。臨床試驗(yàn)應(yīng)選擇不少于3家（含3家）能代表不同地域的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)完成。

1.病例選擇及樣本類(lèi)型

申請(qǐng)人應(yīng)選擇體征/癥狀符合呼吸道感染的目標(biāo)人群，進(jìn)行前瞻性臨床試驗(yàn)。申請(qǐng)人在建立病例納入標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)考慮到各年齡段人群的差異，盡量覆蓋各個(gè)年齡段人群。在進(jìn)行結(jié)果統(tǒng)計(jì)分析時(shí)，除總體病例數(shù)的要求外，建議對(duì)各年齡段人群分層進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析（如<5、6－21、22－59和>60歲），總體病例數(shù)應(yīng)符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。臨床試驗(yàn)入組病例應(yīng)與產(chǎn)品預(yù)期用途中適用人群一致。臨床試驗(yàn)應(yīng)首選新鮮樣本，每種病毒應(yīng)有前瞻性陽(yáng)性樣本檢出；某些呼吸道病毒在人群中具有低流行率，可用已知含特定病毒的樣本（即留存樣本）進(jìn)行補(bǔ)充。如果選擇留存樣本，則應(yīng)證明凍存或其他保存方法的樣本穩(wěn)定性，且應(yīng)使用盲法，避免檢測(cè)偏差。

2.參比方法

申請(qǐng)人應(yīng)選擇已批準(zhǔn)上市、臨床普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的同類(lèi)產(chǎn)品作為參比試劑，采用擬申報(bào)產(chǎn)品（以下稱(chēng)考核試劑）與之進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)研究，證明本品與已上市產(chǎn)品等效或優(yōu)于已上市產(chǎn)品。

如無(wú)已上市產(chǎn)品可選用病毒分離培養(yǎng)鑒定或測(cè)序方法進(jìn)行比對(duì)。對(duì)于難以培養(yǎng)的呼吸道病毒（如人偏肺病毒）也可直接采用測(cè)序方法作為參比方法。

2.1測(cè)序試驗(yàn)中的核酸擴(kuò)增方法所測(cè)靶序列應(yīng)與申報(bào)產(chǎn)品所測(cè)靶序列不同，且申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)該靶序列/引物提供文獻(xiàn)或?qū)嶒?yàn)室數(shù)據(jù)支持。申請(qǐng)人應(yīng)在臨床研究報(bào)告中對(duì)選用的測(cè)序方法做詳細(xì)介紹，并提供以下關(guān)于測(cè)序試驗(yàn)的詳細(xì)信息及資料：

2.1.1測(cè)序方法原理、測(cè)序儀型號(hào)、測(cè)序試劑及消耗品的相關(guān)信息。

2.1.2測(cè)序方法所用引物相關(guān)信息，如基因區(qū)段選擇、分子量、純度、功能性試驗(yàn)等資料。

2.1.3對(duì)所選測(cè)序方法的分析性能進(jìn)行合理驗(yàn)證，尤其是最低檢測(cè)限的確認(rèn)，建議將所選測(cè)序方法與擬申報(bào)產(chǎn)品的相關(guān)性能進(jìn)行適當(dāng)比對(duì)分析。

2.1.4測(cè)序方法應(yīng)建立合理的陽(yáng)性質(zhì)控品和陰性質(zhì)控品對(duì)臨床樣本的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制。

2.1.5提交有代表性的樣本測(cè)序圖譜及結(jié)果分析資料。

2.2病毒培養(yǎng)時(shí)，除細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）外，申請(qǐng)人還應(yīng)進(jìn)行病毒鑒定如病毒特異性抗體染色或PCR擴(kuò)增后測(cè)序。單純的CPE無(wú)法提供準(zhǔn)確的病毒鑒別。申請(qǐng)人應(yīng)提供病毒分離培養(yǎng)的詳細(xì)實(shí)驗(yàn)室流程，以及特定細(xì)胞系可作為分離某種病毒的文獻(xiàn)或數(shù)據(jù)支持。

3.另外，對(duì)于流感病毒，申請(qǐng)人還應(yīng)根據(jù)病毒流行情況選擇新鮮采集樣本，使用考核試劑與流感病毒感染檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”方法—病毒分離培養(yǎng)鑒定方法進(jìn)行比較研究，每種樣本類(lèi)型不少于30例經(jīng)病毒分離培養(yǎng)方法確定為陽(yáng)性的樣本。

4.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

對(duì)臨床試驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)應(yīng)選擇合適的統(tǒng)計(jì)方法，如檢測(cè)結(jié)果一致性分析、陰性/陽(yáng)性符合率等。對(duì)于本類(lèi)產(chǎn)品對(duì)比實(shí)驗(yàn)的等效性研究，常選擇交叉四格表的形式總結(jié)兩種試劑的定性檢測(cè)結(jié)果，對(duì)定性結(jié)果進(jìn)行四格表卡方或kappa檢驗(yàn)以驗(yàn)證兩種試劑定性結(jié)果的一致性，統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)可以證明兩種方法的檢測(cè)結(jié)果無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在臨床研究方案中應(yīng)明確統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)假設(shè)，即評(píng)價(jià)考核試劑與參比試劑是否等效的標(biāo)準(zhǔn)。

申請(qǐng)人應(yīng)分別統(tǒng)計(jì)各病毒檢測(cè)的陰、陽(yáng)性符合率，同時(shí)應(yīng)分別統(tǒng)計(jì)混合感染樣本使用考核試劑和參比試劑的檢測(cè)結(jié)果。如考核試劑存在灰區(qū)，申請(qǐng)人還應(yīng)統(tǒng)計(jì)灰區(qū)樣本使用參比試劑的檢測(cè)結(jié)果。

在數(shù)據(jù)收集過(guò)程中，對(duì)于兩種試劑檢測(cè)結(jié)果不一致的樣本，應(yīng)采用“金標(biāo)準(zhǔn)”方法或臨床上普遍認(rèn)為質(zhì)量較好的第三種同類(lèi)試劑進(jìn)行復(fù)核，同時(shí)結(jié)合患者的臨床病情對(duì)差異原因及可能結(jié)果進(jìn)行分析。

5.臨床試驗(yàn)總結(jié)報(bào)告撰寫(xiě)

根據(jù)《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，臨床試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該對(duì)試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對(duì)整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過(guò)程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法。建議在臨床總結(jié)報(bào)告中對(duì)以下內(nèi)容進(jìn)行詳述。

5.1臨床試驗(yàn)總體設(shè)計(jì)及方案描述

5.1.1臨床試驗(yàn)的整體管理情況、臨床研究單位選擇、臨床主要研究人員簡(jiǎn)介等基本情況介紹。

5.1.2病例納入/排除標(biāo)準(zhǔn)、不同年齡段人群的預(yù)期選擇例數(shù)及標(biāo)準(zhǔn)、盲法的操作流程等。

5.1.3樣本類(lèi)型，樣本的收集、處理及保存等。

5.1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法、統(tǒng)計(jì)軟件、評(píng)價(jià)統(tǒng)計(jì)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)。

5.2具體的臨床試驗(yàn)情況

5.2.1臨床試驗(yàn)所用體外診斷試劑及儀器的名稱(chēng)、批號(hào)、機(jī)型等信息。

5.2.2對(duì)各研究單位的病例數(shù)、年齡分布情況、不同病毒分布情況進(jìn)行綜合，建議以列表或圖示方式列出各年齡組和不同病毒的樣本例數(shù)。

5.2.3質(zhì)量控制，試驗(yàn)人員培訓(xùn)、儀器日常維護(hù)、儀器校準(zhǔn)、質(zhì)控運(yùn)行情況。

5.2.4具體試驗(yàn)過(guò)程，樣本收集、樣本保存、樣本檢測(cè)、結(jié)果處理、結(jié)果不一致樣本的確認(rèn)等。

5.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

5.3.1數(shù)據(jù)預(yù)處理、差異數(shù)據(jù)的重新檢測(cè)或第三方驗(yàn)證以及是否納入最終數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)、對(duì)異常值或缺失值的處理、研究過(guò)程中是否涉及對(duì)方案的修改。

5.3.2結(jié)果的一致性分析

計(jì)算陽(yáng)性符合率、陰性符合率、總體符合率，采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法，如四格表卡方檢驗(yàn)或kappa檢驗(yàn)以驗(yàn)證兩種試劑定性結(jié)果的一致性。

5.4討論和結(jié)論

對(duì)總體結(jié)果進(jìn)行總結(jié)性描述并簡(jiǎn)要分析試驗(yàn)結(jié)果，對(duì)本次臨床研究有無(wú)特別說(shuō)明，最后得出臨床試驗(yàn)結(jié)論。

（八）產(chǎn)品技術(shù)要求

申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)申請(qǐng)人產(chǎn)品研制情況、依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫(xiě)指導(dǎo)原則》（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號(hào)）的有關(guān)要求，編寫(xiě)產(chǎn)品技術(shù)要求。

呼吸道病毒核酸檢測(cè)試劑的產(chǎn)品性能指標(biāo)應(yīng)主要包括：物理性狀、陰/陽(yáng)性參考品符合率、精密度、最低檢測(cè)限等。如果申報(bào)試劑已有適用的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品、參考品發(fā)布，則申請(qǐng)人應(yīng)在產(chǎn)品技術(shù)要求中提出檢測(cè)要求。

按照《辦法》的規(guī)定，此類(lèi)產(chǎn)品為第三類(lèi)體外診斷試劑，申請(qǐng)人應(yīng)按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫(xiě)指導(dǎo)原則》的要求，以附錄形式明確主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求，附錄的編制應(yīng)符合相關(guān)編寫(xiě)規(guī)范的要求。

（九）產(chǎn)品注冊(cè)檢驗(yàn)報(bào)告

應(yīng)提供該產(chǎn)品符合產(chǎn)品技術(shù)要求的、在具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗(yàn)資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)進(jìn)行的產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告；應(yīng)提供連續(xù)3個(gè)生產(chǎn)批次樣品的檢驗(yàn)合格報(bào)告。

（十）產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

結(jié)合《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則》的要求，下面對(duì)呼吸道病毒核酸檢測(cè)試劑說(shuō)明書(shū)的重點(diǎn)內(nèi)容進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明，以指導(dǎo)注冊(cè)申報(bào)人員更合理地完成說(shuō)明書(shū)編制。

1.【預(yù)期用途】

1.1首段：本產(chǎn)品用于定性檢測(cè)人鼻咽拭子、咽拭子或其他樣本的××、××呼吸道病毒核酸。

適用樣本類(lèi)型應(yīng)結(jié)合實(shí)際的臨床研究完成情況進(jìn)行確認(rèn)。應(yīng)明確所有可檢測(cè)的病毒種類(lèi)及亞型。

1.2簡(jiǎn)單介紹待測(cè)目標(biāo)的特征，如病毒種系淵源、生物學(xué)性狀、宿主特性、致病性、感染后臨床表現(xiàn)、待測(cè)靶基因特征等。明確呼吸道病毒核酸試劑的臨床意義，通過(guò)對(duì)有呼吸道感染體征和癥狀的個(gè)體檢測(cè)和鑒別特異性病毒核酸，聯(lián)合其他臨床和實(shí)驗(yàn)室結(jié)果以輔助診斷呼吸道病毒感染。

1.3陰性結(jié)果不能排除呼吸道病毒感染，不能用作診斷、治療或其他管理決策的唯一依據(jù)。

1.4陽(yáng)性結(jié)果不能排除檢測(cè)指標(biāo)外細(xì)菌感染或其他病毒混合感染情況。

1.5待測(cè)人群特征介紹：具有呼吸道病毒感染癥狀的患者、相關(guān)的密切接觸者、地域要求或年齡限制（如有）等，待測(cè)人群應(yīng)與申報(bào)產(chǎn)品臨床試驗(yàn)中入組人群一致。

1.6應(yīng)強(qiáng)調(diào)實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)接受過(guò)基因擴(kuò)增或分子生物學(xué)方法檢測(cè)的專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)，具備相關(guān)的實(shí)驗(yàn)操作資格，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備合理的生物安全防備設(shè)施及防護(hù)程序。

2.【檢驗(yàn)原理】

詳細(xì)說(shuō)明試劑盒技術(shù)原理，及核酸分離/純化方法、原理。說(shuō)明檢測(cè)的靶基因座位、序列長(zhǎng)度等；介紹引物及探針設(shè)計(jì)、不同樣品反應(yīng)體系（管）組合、對(duì)照品（質(zhì)控品）設(shè)置及熒光信號(hào)標(biāo)記等。如添加了相關(guān)的防污染組分，也應(yīng)對(duì)其作用機(jī)理作適當(dāng)介紹。

3.【主要組成成分】

3.1說(shuō)明試劑盒包含組分的名稱(chēng)、數(shù)量、比例或濃度等信息，陰性/陽(yáng)性對(duì)照品（或質(zhì)控品）可能含有人源組分，應(yīng)提供其生物學(xué)來(lái)源、活性及其他特性；明確不同批號(hào)試劑盒中各組分是否可以互換。

3.2試劑盒中不包含但對(duì)該項(xiàng)檢測(cè)必須的組分，企業(yè)應(yīng)列出相關(guān)試劑/耗材的生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱(chēng)、貨號(hào)以及醫(yī)療器械注冊(cè)證號(hào)/備案號(hào)（如有）等詳細(xì)信息。

3.3如果試劑盒中不包含用于核酸分離/純化的試劑組分，則應(yīng)在此注明經(jīng)驗(yàn)證后推薦配合使用的商品化核酸分離/純化試劑盒的如上信息。

4.【儲(chǔ)存條件及有效期】

試劑盒的效期穩(wěn)定性、開(kāi)瓶穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性、凍融次數(shù)要求等，應(yīng)與相應(yīng)的穩(wěn)定性研究結(jié)論一致。

5.【適用儀器】

所有適用的儀器型號(hào)，提供儀器的生產(chǎn)企業(yè)、產(chǎn)品名稱(chēng)、型號(hào)以及醫(yī)療器械注冊(cè)證號(hào)/備案號(hào)（如有）等詳細(xì)信息，以指導(dǎo)用戶(hù)操作。

6.【樣本要求】重點(diǎn)明確以下內(nèi)容：

6.1樣本采集時(shí)間點(diǎn)的選擇：是否受臨床癥狀、用藥情況等因素的影響。

6.2對(duì)采樣拭子、容器及保存液的要求：對(duì)采樣拭子的材質(zhì)要求（包括對(duì)拭子頭和拭子桿的要求）、保存容器、轉(zhuǎn)運(yùn)保存液的要求、轉(zhuǎn)運(yùn)條件等。

6.3樣本采集：具體采集部位及類(lèi)型，詳述具體的操作方法或列出相關(guān)操作指南文件以指導(dǎo)使用者（最好能夠給出具體圖示），盡量減少由于樣本采集或處理不當(dāng)對(duì)實(shí)驗(yàn)造成的影響。樣本的取材及處理方式等若有通用的技術(shù)規(guī)范或指南，則應(yīng)遵循，并在此處引用。

6.4樣本處理及保存：核酸提取前的預(yù)處理、保存條件及期限（短期、長(zhǎng)期）等。冷藏/冷凍樣本檢測(cè)前是否須恢復(fù)室溫，凍融次數(shù)限制。有關(guān)描述均應(yīng)建立在相關(guān)性能評(píng)價(jià)及穩(wěn)定性研究的基礎(chǔ)上。

7.【檢驗(yàn)方法】詳細(xì)說(shuō)明實(shí)驗(yàn)操作的各個(gè)步驟，包括：

7.1試劑配制方法、注意事項(xiàng)。

7.2核酸分離/純化的條件、步驟及注意事項(xiàng)。對(duì)照品（質(zhì)控品）參與樣本核酸的平行提取要求等。應(yīng)對(duì)核酸濃度、純度等指標(biāo)提出質(zhì)量要求。

7.3擴(kuò)增反應(yīng)前準(zhǔn)備：各組分加樣體積、順序、相關(guān)注意事項(xiàng)等。

7.4逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程的溫度和時(shí)間設(shè)置、PCR各階段的溫度、時(shí)間、循環(huán)數(shù)設(shè)置及相關(guān)注意事項(xiàng)。

7.5儀器設(shè)置：特殊參數(shù)，待測(cè)基因、內(nèi)標(biāo)的熒光通道選擇等。

7.6質(zhì)量控制：說(shuō)明對(duì)照品（質(zhì)控品）的檢測(cè)要求。質(zhì)控品如不與申報(bào)產(chǎn)品一同提供，應(yīng)說(shuō)明質(zhì)控品規(guī)格，包括病毒水平、病毒來(lái)源、滅活方法和生物安全性測(cè)定方法。

8.【陽(yáng)性判斷值】

簡(jiǎn)要總結(jié)陽(yáng)性判斷值研究方法及結(jié)論。

9.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

結(jié)合對(duì)照品（質(zhì)控品）以及樣本管中靶基因和內(nèi)標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果，對(duì)所有可能出現(xiàn)的結(jié)果組合及相應(yīng)的解釋進(jìn)行詳述。檢驗(yàn)結(jié)果的解釋?xiě)?yīng)以陽(yáng)性判斷值的研究結(jié)論為依據(jù)。如有適用的臨床診療或篩查指南，則應(yīng)在此項(xiàng)下引用，相應(yīng)檢驗(yàn)結(jié)果的解釋?xiě)?yīng)符合相關(guān)指南的要求。

10.【檢驗(yàn)方法的局限性】

應(yīng)至少包括如下描述：

10.1本試劑檢測(cè)結(jié)果應(yīng)結(jié)合患者臨床癥狀及其他相關(guān)醫(yī)學(xué)檢查結(jié)果進(jìn)行綜合分析，不得單獨(dú)作為患者管理的依據(jù)。

10.2檢驗(yàn)的病毒核酸出現(xiàn)序列變異時(shí)會(huì)存在假陰性風(fēng)險(xiǎn)。

10.3不合理的樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)及處理以及不當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)操作和實(shí)驗(yàn)環(huán)境均有可能導(dǎo)致假陰性或假陽(yáng)性結(jié)果。

10.4申報(bào)產(chǎn)品應(yīng)明確不同病程不同階段樣本的陽(yáng)性率不一致。

10.5取標(biāo)本期間，接種減毒活疫苗的患者可能會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)試劑檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性。

10.6陽(yáng)性和陰性預(yù)測(cè)值很大程度上取決于流行率。該檢驗(yàn)性能是在流行季節(jié)期間（如2018/2019）確立。對(duì)某些病毒的檢驗(yàn)性能可能隨檢測(cè)流行率和檢測(cè)人群變化。

10.7待檢核酸序列可能長(zhǎng)時(shí)間出現(xiàn)在體內(nèi)，而與病毒活性無(wú)關(guān)。核酸檢測(cè)陽(yáng)性并一定不意味著目前感染了相應(yīng)病毒或其為臨床癥狀的致病因子。

11.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

依據(jù)分析性能評(píng)估資料，詳述以下性能指標(biāo)：

11.1對(duì)相應(yīng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品、參考品（如有）檢測(cè)的符合情況。

11.2最低檢測(cè)限

11.3企業(yè)內(nèi)部陽(yáng)性/陰性參考品符合率

11.4精密度：精密度評(píng)價(jià)結(jié)果可采用列表形式描述。

11.5分析特異性：建議以列表方式說(shuō)明驗(yàn)證的其他呼吸道病毒亞型、相關(guān)病原體等的交叉反應(yīng)性及其驗(yàn)證濃度水平。總結(jié)潛在干擾物質(zhì)的評(píng)價(jià)濃度水平及干擾情況。

11.6簡(jiǎn)要描述臨床試驗(yàn)的基本信息、試驗(yàn)方法和結(jié)論。

12.【注意事項(xiàng)】

應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

12.1如該產(chǎn)品含有人源或動(dòng)物源性物質(zhì)，應(yīng)給出生物安全性的警告。

12.2臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格按照《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室管理辦法》（衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)〔2010〕194號(hào)或現(xiàn)行有效版本）等有關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室、臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的管理規(guī)范執(zhí)行。

12.3強(qiáng)調(diào)產(chǎn)品性能僅針對(duì)聲稱(chēng)的適用樣本類(lèi)型及【樣本要求】項(xiàng)下說(shuō)明的樣本采集和處理方法（包括樣本采集液等）進(jìn)行了驗(yàn)證，其他樣本類(lèi)型或樣本采集、處理方法不能保證產(chǎn)品性能。

三、名詞解釋

PCR-熒光探針?lè)ǎ涸赑CR過(guò)程中利用熒光標(biāo)記的特異性探針，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，釋放的熒光能量的變化直接反映出PCR擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化，并通過(guò)對(duì)熒光的采集和分析以達(dá)到對(duì)原始模板量進(jìn)行分析的PCR。

四、起草單位

國(guó)家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心。