附件：乙型肝炎病毒e抗原、e抗體檢測試劑注冊(cè)技術(shù)審查指導(dǎo)原則（2020年第16號(hào)）.doc

乙型肝炎病毒e抗原、e抗體檢測試劑注冊(cè)
技術(shù)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)乙型肝炎病毒e抗原、e抗體檢測試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門審評(píng)注冊(cè)申報(bào)資料提供參考。

本指導(dǎo)原則是針對(duì)乙型肝炎病毒e抗原、e抗體檢測試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供申請(qǐng)人和審查人員使用的指導(dǎo)性文件，不涉及注冊(cè)審批等行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，如有能夠滿足法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但應(yīng)提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)體系及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定的，隨著法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善和科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

（一）背景簡介

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）屬嗜肝DNA 病毒科，是乙型病毒性肝炎的病原體。HBV 主要經(jīng)血（如不安全注射等）、母嬰及性接觸傳播。HBV 感染呈世界性流行，但不同地區(qū)HBV感染的流行強(qiáng)度差異很大。據(jù)世界衛(wèi)生組織報(bào)道，全球約20億人曾感染HBV，其中2.4 億人為慢性HBV感染者，每年約有65萬人死于HBV感染所致的肝功能衰竭、肝硬化和肝細(xì)胞癌（HCC）。

通過免疫學(xué)方法檢測HBV標(biāo)志物是臨床最常用的HBV感染的病原學(xué)診斷方法。HBV具有三個(gè)抗原系統(tǒng)，如：乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）與乙型肝炎病毒表面抗體（抗-HBs）、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）與乙型肝炎病毒e抗體（抗-HBe）、乙型肝炎病毒核心抗體（抗-HBc）及抗-HBc-IgM。HBV抗原與抗體的血清學(xué)標(biāo)志物與臨床關(guān)系復(fù)雜，必須對(duì)幾項(xiàng)標(biāo)志物綜合分析，方有助于臨床診療。

HBeAg是從病毒C基因的第一個(gè)起始密碼子開始翻譯產(chǎn)生的包含Pre C及C序列的蛋白，該蛋白經(jīng)細(xì)胞內(nèi)蛋白酶切除其N端19個(gè)氨基酸及C端34個(gè)氨基酸后成為可分泌的e抗原。HBeAg為可溶性蛋白質(zhì)，產(chǎn)生后分泌入血，在患者癥狀出現(xiàn)后大約1周出現(xiàn)，通常在幾周后消失，但在HBV慢性感染者體內(nèi)可能持續(xù)存在。

血清HBeAg與HBV復(fù)制及疾病傳染性相關(guān)，HBV感染患者的血清中存在HBeAg是病毒活躍復(fù)制的指標(biāo)。在HBsAg陽性人群中，HBeAg的消失以及抗-HBe的出現(xiàn)是血清學(xué)轉(zhuǎn)換的標(biāo)志，表示病毒復(fù)制活躍程度的下降。但是，臨床上存在病毒復(fù)制活躍的患者血清中HBeAg為陰性的情況，如：HBV基因組前C區(qū)1896位堿基的終止密碼變異，可導(dǎo)致HBeAg陰性。

（二）本指導(dǎo)原則適用范圍

1.本指導(dǎo)原則適用于利用酶聯(lián)免疫法、化學(xué)發(fā)光法、時(shí)間分辨免疫熒光法等免疫學(xué)方法，對(duì)來源于血清或血漿等人體樣本中的HBeAg、抗-HBe進(jìn)行體外檢測，其臨床預(yù)期用途如下：

1.1HBeAg適用于：急性及慢性乙型肝炎病毒感染的輔助診斷；慢性乙型肝炎病毒感染者HBeAg陽性與陰性人群區(qū)分；慢性乙型肝炎患者HBeAg 血清學(xué)轉(zhuǎn)換的判定。該指標(biāo)定量檢測可用于抗病毒療效的監(jiān)測等。

1.2抗-HBe適用于：急性及慢性乙型肝炎病毒感染的輔助診斷及慢性乙型肝炎患者HBeAg 血清學(xué)轉(zhuǎn)換的判定。目前該標(biāo)志物定量檢測的臨床意義尚不明確。

2.本指南適用于檢測HBeAg、抗-HBe的定性檢測試劑，關(guān)于HBeAg的定量檢測可參考本指南。

二、注冊(cè)申報(bào)資料要求

（一）綜述資料

綜述資料主要包括產(chǎn)品預(yù)期用途、產(chǎn)品描述、有關(guān)生物安全性的說明、有關(guān)產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評(píng)價(jià)以及其他等內(nèi)容。其中，與預(yù)期用途相關(guān)的臨床適應(yīng)癥應(yīng)重點(diǎn)描述申報(bào)產(chǎn)品臨床預(yù)期用途，包括適用人群、適應(yīng)癥及臨床使用環(huán)境；產(chǎn)品描述應(yīng)明確申報(bào)產(chǎn)品主要組成成分及檢測原理；同類產(chǎn)品在國內(nèi)外批準(zhǔn)上市的情況，應(yīng)著重從預(yù)期用途、產(chǎn)品性能等方面寫明擬申報(bào)產(chǎn)品與目前市場上已獲批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。綜述資料的撰寫應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第5號(hào)）和《關(guān)于公布體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)資料要求和批準(zhǔn)證明文件格式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第44號(hào)）的相關(guān)要求。

（二）主要原材料研究資料

1.主要原材料的范圍

體外診斷試劑產(chǎn)品主要原材料是指影響檢測反應(yīng)的靈敏度與特異性的生物活性物質(zhì)，本指導(dǎo)原則涉及產(chǎn)品的主要原材料如下：

1.1 HBeAg檢測試劑：包被用抗-HBe，標(biāo)記用抗-HBe，反應(yīng)體系中各種信號(hào)放大、顯示系統(tǒng)中涉及的生物活性物質(zhì)，試劑盒中包含的定標(biāo)液/對(duì)照品（如涉及）、質(zhì)控品（如涉及）等。

1.2抗-HBe檢測試劑：包被用抗-HBe，標(biāo)記用抗-HBe，HBeAg，反應(yīng)體系中各種信號(hào)放大、顯示系統(tǒng)中涉及的生物活性物質(zhì)，試劑盒中包含的定標(biāo)液/對(duì)照品（如涉及）、質(zhì)控品（如涉及）等。

2.主要原材料的篩選

申請(qǐng)人應(yīng)提供主要原材料的篩選過程及相關(guān)研究資料。主要原材料的篩選過程應(yīng)有科學(xué)合理的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、完整的實(shí)驗(yàn)過程、詳實(shí)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)及統(tǒng)計(jì)分析過程，申請(qǐng)人應(yīng)能夠依據(jù)研究過程確定產(chǎn)品的主要原材料。

2.1如主要原材料為外購，應(yīng)確定供應(yīng)商名稱，供應(yīng)商應(yīng)為原材料的生產(chǎn)商，供應(yīng)商應(yīng)固定，不得隨意更換。同時(shí)，抗原應(yīng)明確抗原名稱、生物學(xué)來源；抗體明確抗體名稱、生物學(xué)來源、刺激免疫原名稱及其來源（天然或重組）、克隆號(hào)（如為單克隆抗體）等信息。

2.2如主要原材料為申請(qǐng)人自制，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)明確原材料的制備原理，描述制備過程。如抗原為天然抗原，應(yīng)明確抗原制備所選病毒毒株、病毒的培養(yǎng)、抗原提取及純化、抗原鑒定等方法及相關(guān)參數(shù)；如為重組抗原，則應(yīng)寫明目的基因的選擇及來源、基因克隆過程（如特定脫氧核糖核酸（DNA）分子的體外處理、重組連接、轉(zhuǎn)化和宿主細(xì)胞繁殖等實(shí)驗(yàn)過程）、抗原表達(dá)及抗原純化鑒定等方法及相關(guān)參數(shù)。針對(duì)主要原材料抗體，應(yīng)明確免疫刺激原的名稱及來源。如為多克隆抗體，應(yīng)明確免疫動(dòng)物品系及抗體的收集、純化過程；如為單克隆抗體，應(yīng)明確免疫動(dòng)物品系，雜交瘤細(xì)胞的制備、細(xì)胞的培養(yǎng)及抗體的收集、純化過程。

3.主要原材料的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)

主要原材料的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)是生產(chǎn)企業(yè)對(duì)主要原材料的質(zhì)量控制，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)依據(jù)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)對(duì)原材料進(jìn)行檢驗(yàn)，檢驗(yàn)合格方可用于生產(chǎn)。申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品生產(chǎn)需求，制定科學(xué)、合理的主要原材料質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，在制定標(biāo)準(zhǔn)過程中建議遵循以下幾點(diǎn)：

3.1 主要原材料的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)包括相應(yīng)實(shí)驗(yàn)方法及原材料應(yīng)達(dá)到的客觀評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。

3.2主要原材料的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)至少包括原材料的功能性指標(biāo)要求，功能性指標(biāo)可以為功能性實(shí)驗(yàn)指標(biāo)或其他體現(xiàn)原材料相應(yīng)生物活性的指標(biāo)。

3.3人源或其他生物源性原材料質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)中應(yīng)包含生物安全性指標(biāo)。

3.4對(duì)于涉及標(biāo)記的主要原材料，如外購方提供的為已標(biāo)記好的原材料，則原材料質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)除了對(duì)原材料本身的質(zhì)量控制外，還應(yīng)依據(jù)標(biāo)記物特性，針對(duì)標(biāo)記物制定相應(yīng)的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

3.5質(zhì)控品、定標(biāo)液/對(duì)照品，主要原材料質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)除被分析物外，還應(yīng)包含基質(zhì)的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，例如基質(zhì)中被分析物的濃度要求、陰陽性要求及生物安全性指標(biāo)（如適用），質(zhì)控品應(yīng)明確賦值方法。

本指導(dǎo)原則涉及的主要原材料常見的質(zhì)量控制指標(biāo)見表1。申請(qǐng)人可根據(jù)產(chǎn)品生產(chǎn)及質(zhì)量控制需求，針對(duì)主要原材料制定合理的控制標(biāo)準(zhǔn)。申請(qǐng)人需在申報(bào)資料中提供依據(jù)主要原材料的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)對(duì)原材料進(jìn)行質(zhì)檢的資料，如主要原材料為外購，還需提供主要原材料供應(yīng)商的出廠檢測報(bào)告。

4.企業(yè)參考品

申請(qǐng)人應(yīng)提交企業(yè)參考品的原料選擇、制備、陰陽性確認(rèn)等詳細(xì)研究資料。

企業(yè)參考品的基質(zhì)建議與申報(bào)產(chǎn)品適用的樣本類型一致。企業(yè)參考品應(yīng)至少包括：陽性參考品、陰性參考品、檢測限參考品、精密度參考品。參考品設(shè)置建議參考國家參考品，陽性參考品應(yīng)著重考慮抗原濃度/抗體滴度要求，陰性參考品則主要考慮對(duì)產(chǎn)品分析特異性（交叉反應(yīng)）的驗(yàn)證情況。

（三）主要生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系的研究資料

1.主要生產(chǎn)工藝介紹，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。

2.產(chǎn)品基本反應(yīng)原理介紹，HBeAg檢測試劑一般采用雙抗體夾心法，抗-HBe檢測試劑一般為競爭法。

3.申請(qǐng)人應(yīng)提供產(chǎn)品生產(chǎn)工藝確定的研究資料，如：包被工藝、標(biāo)記工藝（如涉及）、顯色（發(fā)光）系統(tǒng)等研究資料。

4.反應(yīng)條件確定：申請(qǐng)人應(yīng)考慮反應(yīng)時(shí)間、反應(yīng)溫度、洗滌次數(shù)等條件對(duì)產(chǎn)品性能的影響，通過實(shí)驗(yàn)確定上述條件的最佳組合。如涉及，申請(qǐng)人應(yīng)提供酶催化底物（發(fā)光或變色）的最適條件研究。

5.體系中樣品加樣方式及加樣量確定：申請(qǐng)人應(yīng)考慮樣品加樣方式、加樣量對(duì)產(chǎn)品檢測結(jié)果的影響，通過實(shí)驗(yàn)確定最佳的加樣方式及加樣量。如樣本需采取稀釋或其他必要的方法進(jìn)行處理后方可用于最終檢測，申請(qǐng)人還應(yīng)對(duì)可用于樣本稀釋的基質(zhì)或處理方法進(jìn)行研究，通過實(shí)驗(yàn)確定最終選擇的用于樣本稀釋的基質(zhì)或處理方法。

6.不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別研究。

（四）分析性能評(píng)估資料

申請(qǐng)人應(yīng)提交產(chǎn)品所有性能評(píng)價(jià)的研究資料，對(duì)于每項(xiàng)分析性能的評(píng)價(jià)都應(yīng)包括具體研究目的、實(shí)驗(yàn)方法、可接受標(biāo)準(zhǔn)、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)方法等詳細(xì)資料。有關(guān)分析性能驗(yàn)證的背景信息也應(yīng)在申報(bào)資料中有所體現(xiàn)，包括實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)、適用儀器、試劑規(guī)格、批號(hào)、臨床樣本來源等。

分析性能評(píng)價(jià)的實(shí)驗(yàn)方法可以參考國際或國內(nèi)有關(guān)體外診斷試劑性能評(píng)估的指導(dǎo)原則進(jìn)行。對(duì)于此類產(chǎn)品，性能評(píng)估中所用樣品（除非特別說明）可參考上述企業(yè)參考品的制備要求。各項(xiàng)性能評(píng)價(jià)應(yīng)符合以下要求。

1.陰/陽性參考品符合率

申請(qǐng)人應(yīng)考察申報(bào)產(chǎn)品檢測企業(yè)陰/陽性參考品的符合情況，陽性參考品重在評(píng)估產(chǎn)品包容性，陰性參考品旨在評(píng)價(jià)試劑特異性。企業(yè)參考品的檢測應(yīng)符合參考品說明書的要求。

2.最低檢測限（分析靈敏度）

申報(bào)產(chǎn)品最低檢測限的性能評(píng)估資料應(yīng)包含最低檢測限的確定及驗(yàn)證過程。

2.1選取至少3份高濃度臨床樣本，采用臨床參考方法或國家/國際標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)其檢測靶物質(zhì)濃度進(jìn)行確定，之后將臨床樣本做系列倍比稀釋，將檢測結(jié)果的陽性率在90%～95%（n≥20）的最大稀釋倍數(shù)作為試劑盒的最低檢測限。

2.2申報(bào)產(chǎn)品檢測企業(yè)最低檢測限參考品，檢測結(jié)果應(yīng)滿足相應(yīng)要求。

3.準(zhǔn)確性

采用多份陰性及陽性臨床樣本，將試驗(yàn)用體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品等進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)，評(píng)價(jià)檢測結(jié)果一致性。臨床樣本收集過程中應(yīng)考慮不同濃度及患者感染病毒的基因型（我國主要流行的B、C、D型）。

4.精密度

企業(yè)應(yīng)對(duì)申報(bào)產(chǎn)品精密度指標(biāo)，如標(biāo)準(zhǔn)差或變異系數(shù)等評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)作出合理要求。因模擬樣本并不能體現(xiàn)臨床樣本可能帶來的所有變異因素，因此精密度評(píng)價(jià)中所用樣本應(yīng)至少包含精密度參考品及若干臨床樣本。針對(duì)本類產(chǎn)品的精密度評(píng)價(jià)主要包括以下要求：

4.1對(duì)可能影響檢測精密度的主要變量進(jìn)行驗(yàn)證，除檢測試劑本身的影響外，還應(yīng)對(duì)分析儀、操作者、實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)、檢測批次等要素進(jìn)行相關(guān)的驗(yàn)證。

4.2設(shè)定合理的精密度評(píng)價(jià)周期，例如：為期至少20天的檢測，每天至少由2人完成不少于2次的完整檢測，從而對(duì)批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間以及不同操作者之間的精密度進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。

4.3用于精密度評(píng)價(jià)的臨床樣本均應(yīng)至少包含3個(gè)水平：臨界陽性樣品、中及強(qiáng)陽性樣品，并根據(jù)產(chǎn)品特性設(shè)定適當(dāng)?shù)木芏纫蟆?/p>

5.分析特異性

5.1交叉反應(yīng)：

申請(qǐng)人應(yīng)針對(duì)可能出現(xiàn)在檢測樣本中的病原體進(jìn)行交叉反應(yīng)驗(yàn)證，用于交叉反應(yīng)驗(yàn)證的樣品，除乙型肝炎病毒相關(guān)標(biāo)志物外，評(píng)估 HBeAg檢測試劑交叉反應(yīng)的樣本應(yīng)盡量采用滅活病原體培養(yǎng)物或臨床相關(guān)病原體抗原陽性樣本；評(píng)估抗-HBe檢測試劑交叉反應(yīng)的樣本應(yīng)盡量采用臨床相關(guān)病原體抗體陽性樣本。病原體種類應(yīng)包括人類EB病毒（EBV）、巨細(xì)胞病毒（CMV）、人類免疫缺陷病毒（HIV）、乙型肝炎病毒（表面抗原/抗體、核心抗體）、丙型肝炎病毒（HCV）等。建議在病毒感染的醫(yī)學(xué)決定水平進(jìn)行交叉反應(yīng)的驗(yàn)證，申請(qǐng)人應(yīng)詳細(xì)說明交叉反應(yīng)樣本來源、病原體鑒定和滴度確定的方法和結(jié)果等。

5.2干擾物質(zhì)

應(yīng)根據(jù)所采集樣本類型，針對(duì)可能存在的干擾情況進(jìn)行驗(yàn)證。建議申請(qǐng)人在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度條件（“最差條件”）下進(jìn)行評(píng)價(jià)，干擾物質(zhì)的選取應(yīng)至少包括：血紅蛋白、膽紅素、甘油三酯、類風(fēng)濕因子、自身抗體及常見治療性藥物等。建議采用弱陽性水平樣本對(duì)每種干擾物質(zhì)的干擾影響進(jìn)行檢測。

5.3其他

抗凝劑研究，如申請(qǐng)人聲稱產(chǎn)品適用樣本類型為血漿或血清，建議申請(qǐng)人采用血清血漿同源比對(duì)的方式對(duì)抗凝劑干擾進(jìn)行研究，研究應(yīng)能夠覆蓋所有聲稱的抗凝劑種類。

6.鉤狀（HOOK）效應(yīng)

須采用多份高濃度樣本進(jìn)行梯度稀釋后由低濃度至高濃度開始檢測，每個(gè)梯度的稀釋液重復(fù)3～5份，對(duì)鉤狀效應(yīng)進(jìn)行合理的驗(yàn)證。用于該項(xiàng)研究的樣本可為人工構(gòu)建樣本，建議在產(chǎn)品說明書上明示對(duì)鉤狀效應(yīng)的研究結(jié)果。申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的反應(yīng)原理選擇是否進(jìn)行此項(xiàng)研究。

7.血清學(xué)轉(zhuǎn)換研究

如果申報(bào)產(chǎn)品聲稱檢測試劑還適用于血清學(xué)轉(zhuǎn)換的檢測，應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)性能研究?？刹捎蒙陥?bào)產(chǎn)品與已上市同類產(chǎn)品同時(shí)檢測不少于五套經(jīng)充分確認(rèn)的乙型肝炎患者系列采集樣本，也可采用申報(bào)產(chǎn)品檢測不少于五套的商業(yè)化的血清轉(zhuǎn)換盤。研究應(yīng)當(dāng)顯示出患者發(fā)生血清學(xué)轉(zhuǎn)換過程中HBeAg消失、抗-HBe出現(xiàn)的趨勢，同時(shí)，申報(bào)產(chǎn)品檢測結(jié)果應(yīng)與已上市同類產(chǎn)品檢測結(jié)果一致，或滿足商業(yè)化的血清轉(zhuǎn)換盤的使用要求。

（五）陽性判斷值確定資料

此類產(chǎn)品臨界值通常采用定標(biāo)液/對(duì)照品檢測結(jié)果經(jīng)特定的計(jì)算公式得出，樣本檢測結(jié)果通過與臨界值進(jìn)行比較以判斷檢測結(jié)果的陰陽性。建議申請(qǐng)人采用受試者工作特征（ROC）曲線的方式進(jìn)行臨界值的研究，明確臨界值的計(jì)算公式。研究過程中應(yīng)選取適當(dāng)?shù)呐R床樣本，應(yīng)包括經(jīng)確認(rèn)的標(biāo)志物為陽性的樣本及經(jīng)確認(rèn)標(biāo)志物為陰性的樣本。研究所需的樣本量應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。

如申報(bào)產(chǎn)品陽性判斷值包含灰區(qū)，應(yīng)明確灰區(qū)的確定依據(jù)，并提供相應(yīng)支持性資料。

在陽性判斷值設(shè)定后，申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)選取一定數(shù)量陰、陽性真實(shí)臨床樣本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。

（六）穩(wěn)定性研究資料

穩(wěn)定性研究資料主要涉及兩部分內(nèi)容，申報(bào)試劑的穩(wěn)定性和適用樣本的穩(wěn)定性研究。前者主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性（有效期）、開瓶穩(wěn)定性等研究，申請(qǐng)人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括研究方法的確定依據(jù)、具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)以及結(jié)論。對(duì)于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批樣品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

申請(qǐng)人應(yīng)對(duì)樣本穩(wěn)定性進(jìn)行研究，主要包括冷藏和冷凍兩種條件下的有效期驗(yàn)證，可以在合理的溫度范圍內(nèi)，每間隔一定的時(shí)間段對(duì)儲(chǔ)存樣本進(jìn)行性能分析驗(yàn)證，從而確認(rèn)不同類型樣本的穩(wěn)定性。適于冷凍保存的樣本還應(yīng)對(duì)凍融次數(shù)進(jìn)行評(píng)價(jià)。

試劑穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性兩部分內(nèi)容的研究結(jié)果均應(yīng)在說明書【儲(chǔ)存條件及有效期】和【樣本要求】兩項(xiàng)中進(jìn)行詳細(xì)說明。

（七）臨床試驗(yàn)

臨床試驗(yàn)的開展、方案的制定以及報(bào)告的撰寫等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求。

1.研究方法

該類產(chǎn)品臨床試驗(yàn)建議采用觀察性研究。臨床試驗(yàn)可采用試驗(yàn)用體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品（對(duì)比試劑）進(jìn)行比較研究，評(píng)價(jià)兩種方法檢測結(jié)果的一致性，評(píng)價(jià)指標(biāo)通常包括陽性符合率、陰性符合率等。對(duì)比試劑在預(yù)期用途、適用人群、樣本類型、檢測方法學(xué)、檢測性能等方面應(yīng)與試驗(yàn)用體外診斷試劑具有較好的可比性。

如申報(bào)產(chǎn)品在該類產(chǎn)品現(xiàn)有的臨床預(yù)期用途下，有新的臨床預(yù)期用途（如：定量檢測產(chǎn)品的治療效果監(jiān)測等），應(yīng)采用試驗(yàn)用體外診斷試劑與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較研究，對(duì)產(chǎn)品新預(yù)期用途進(jìn)行臨床評(píng)價(jià)。臨床參考標(biāo)準(zhǔn)是指現(xiàn)有條件下臨床上可獲得的能夠用來確定受試者目標(biāo)狀態(tài)的最佳方法，通常來自臨床和實(shí)驗(yàn)室的醫(yī)學(xué)實(shí)踐，包括患者跟蹤隨訪等。

如申報(bào)產(chǎn)品性能優(yōu)于已上市同類產(chǎn)品，如產(chǎn)品靈敏度顯著高于已上市同類產(chǎn)品，可將試驗(yàn)用體外診斷試劑與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)的比較研究和試驗(yàn)用體外診斷試劑與境內(nèi)已上市同類產(chǎn)品的比較研究相結(jié)合，對(duì)產(chǎn)品的臨床性能進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，從而支持預(yù)期用途所聲稱的內(nèi)容。

2.受試者選擇及樣本收集

臨床試驗(yàn)方案中應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)用體外診斷試劑的預(yù)期用途、目標(biāo)人群和檢測要求等合理確定臨床試驗(yàn)受試者的選擇要求和樣本收集方法，包括：受試者入組/排除標(biāo)準(zhǔn)、樣本收集的前瞻性和回顧性設(shè)計(jì)等。

根據(jù)產(chǎn)品臨床驗(yàn)證的目的，入組人群應(yīng)包含不同年齡段、不同性別人群，以及一定數(shù)量的孕婦。入組人群還應(yīng)包括急性及慢性病毒性乙型肝炎患者，同時(shí)根據(jù)臨床驗(yàn)證需要，入組病例應(yīng)包括不同疾病進(jìn)展期（如：免疫耐受期、免疫活動(dòng)期等）的患者。如申報(bào)產(chǎn)品聲稱可適用于“疾病監(jiān)測”，臨床試驗(yàn)應(yīng)入組符合要求的病例，進(jìn)行患者跟蹤隨訪研究。

臨床試驗(yàn)中所涉及的樣本類型應(yīng)為實(shí)際臨床檢測中常用的樣本類型。如申報(bào)產(chǎn)品所適用的樣本類型同時(shí)包含血清、血漿等多個(gè)樣本類型，應(yīng)針對(duì)不同樣本類型進(jìn)行同源比對(duì)。

建議臨床試驗(yàn)采用前瞻性收集的樣本進(jìn)行研究，同時(shí)，在嚴(yán)格控制偏倚的前提下，允許入組部分符合要求的既往留存樣本。

3.臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)數(shù)量和要求

該類產(chǎn)品臨床試驗(yàn)應(yīng)在不少于3家（含3家）符合要求的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)開展。申辦者應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)及其預(yù)期用途，綜合不同地區(qū)乙型肝炎病毒流行情況等因素選擇具有代表性的機(jī)構(gòu)開展臨床試驗(yàn)，包括受試人群的代表性等。

4.臨床評(píng)價(jià)指標(biāo)

該類產(chǎn)品臨床評(píng)價(jià)指標(biāo)主要包括試驗(yàn)用體外診斷試劑與已上市同類產(chǎn)品相比的陽性符合率、陰性符合率等。如試驗(yàn)用體外診斷試劑與臨床參考方法進(jìn)行對(duì)比研究，其臨床評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)包括臨床靈敏度、臨床特異度等。

5.臨床試驗(yàn)樣本量估算

適當(dāng)?shù)臉颖玖渴潜ＷC申報(bào)產(chǎn)品臨床性能得到準(zhǔn)確評(píng)價(jià)的必要條件。臨床試驗(yàn)樣本量應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，可采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行估算。臨床試驗(yàn)樣本量估算的方法有很多，如單組目標(biāo)值法、優(yōu)效性試驗(yàn)的樣本量估算等。

HBeAg、抗-HBe檢測試劑為定性檢測產(chǎn)品，如臨床試驗(yàn)采用申報(bào)產(chǎn)品與已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比對(duì)的試驗(yàn)設(shè)計(jì)，可采用單組目標(biāo)值法樣本量公式估算最低樣本量。樣本量估算過程中，評(píng)價(jià)指標(biāo)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)（P0）即HBeAg、抗-HBe檢測試劑臨床陰/陽性符合率應(yīng)大于95%。

如申報(bào)產(chǎn)品性能顯著優(yōu)于已上市同類產(chǎn)品，可將試驗(yàn)用體外診斷試劑與臨床參考標(biāo)準(zhǔn)的比較研究和試驗(yàn)用體外診斷試劑與境內(nèi)已上市同類產(chǎn)品的比較研究相結(jié)合，進(jìn)行臨床研究，可采用優(yōu)效性試驗(yàn)樣本量估算的方法估算樣本量。

樣本量估算過程中需要考慮臨床試驗(yàn)中病例的剔除率，一般而言，病例剔除率不應(yīng)高于10%。

臨床試驗(yàn)樣本量除需滿足上述統(tǒng)計(jì)學(xué)估算的最低樣本量要求外，還應(yīng)保證入組病例覆蓋受試者的各種特征；如臨床試驗(yàn)研究有更合理的樣本量估算方式，在說明其合理性后亦可采用。

6.統(tǒng)計(jì)分析

臨床試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析，應(yīng)與臨床試驗(yàn)?zāi)康囊恢?，如臨床試驗(yàn)?zāi)康臑轵?yàn)證申報(bào)產(chǎn)品與已上市產(chǎn)品的一致性，統(tǒng)計(jì)分析一般以2×2表的形式總結(jié)兩種分析方法的檢測結(jié)果，并據(jù)此計(jì)算陽性符合率、陰性符合率、總符合率、Kappa值等指標(biāo)及其可信區(qū)間。除此之外，還應(yīng)同時(shí)進(jìn)行假設(shè)檢驗(yàn)評(píng)價(jià)兩種分析方法的一致性。

如產(chǎn)品臨床試驗(yàn)采用其他統(tǒng)計(jì)學(xué)模型進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，如優(yōu)效性試驗(yàn)等，應(yīng)充分說明其合理性。

7.倫理學(xué)要求

臨床試驗(yàn)必須符合赫爾辛基宣言的倫理學(xué)準(zhǔn)則，必須獲得臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)倫理委員會(huì)的同意。研究者應(yīng)充分考慮臨床試驗(yàn)用樣本的獲得和試驗(yàn)結(jié)果對(duì)受試者的風(fēng)險(xiǎn)性，應(yīng)提交倫理委員會(huì)的審查意見。

8.質(zhì)量控制

臨床試驗(yàn)開始前，建議進(jìn)行臨床試驗(yàn)的預(yù)試驗(yàn)，以熟悉并掌握相關(guān)試驗(yàn)方法的操作、儀器、技術(shù)性能等，最大限度控制試驗(yàn)誤差。整個(gè)試驗(yàn)過程都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

9.接受境外臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)要求

如進(jìn)口產(chǎn)品提交境外臨床試驗(yàn)資料作為臨床評(píng)價(jià)資料時(shí)，其境外臨床試驗(yàn)資料在滿足《接受醫(yī)療器械境外臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)技術(shù)指導(dǎo)原則》要求的基礎(chǔ)上，應(yīng)至少有一家臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)在中國境內(nèi)，檢測病例數(shù)不低于總病例數(shù)的1/3。評(píng)價(jià)過程應(yīng)評(píng)估境外和境內(nèi)人群中HBV的流行情況存在的差異。

（八）產(chǎn)品技術(shù)要求

申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)申請(qǐng)人產(chǎn)品研制、臨床評(píng)價(jià)等結(jié)果，依據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)及有關(guān)文獻(xiàn)，按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第9號(hào)）的有關(guān)要求，編寫產(chǎn)品技術(shù)要求。

HBeAg、抗-HBe檢測試劑的產(chǎn)品性能指標(biāo)應(yīng)主要包括：物理性狀、陰/陽性參考品符合率、精密度、最低檢測限等。申報(bào)試劑已有適用的國家標(biāo)準(zhǔn)品、參考品發(fā)布，申請(qǐng)人應(yīng)在產(chǎn)品技術(shù)要求中提出檢測要求。

按照《辦法》的規(guī)定，此類產(chǎn)品為第三類體外診斷試劑，申請(qǐng)人應(yīng)按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的要求，以附錄形式明確主要原材料、生產(chǎn)工藝及半成品要求，附錄的編制應(yīng)符合相關(guān)編寫規(guī)范的要求。

（九）產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告

根據(jù)《辦法》的要求，首次申請(qǐng)注冊(cè)的第三類體外診斷試劑產(chǎn)品應(yīng)在具有相應(yīng)醫(yī)療器械檢驗(yàn)資質(zhì)和承檢范圍的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)進(jìn)行連續(xù)3個(gè)生產(chǎn)批次樣品的產(chǎn)品檢驗(yàn)。產(chǎn)品檢驗(yàn)報(bào)告應(yīng)符合相應(yīng)的國家標(biāo)準(zhǔn)品、參考品的要求。

（十）產(chǎn)品說明書

說明書承載了產(chǎn)品預(yù)期用途、樣本采集及處理、檢驗(yàn)方法、檢驗(yàn)結(jié)果的解釋以及注意事項(xiàng)等重要信息，是指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室工作人員正確操作、臨床醫(yī)生針對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果給出合理醫(yī)學(xué)解釋的重要依據(jù)，因此，產(chǎn)品說明書是體外診斷試劑注冊(cè)申報(bào)最重要的文件之一。產(chǎn)品說明書的格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局通告2014年第17號(hào)）的要求，進(jìn)口體外診斷試劑的中文說明書除格式要求外，其內(nèi)容應(yīng)盡量保持與原文說明書的一致性，翻譯力求準(zhǔn)確且符合中文表達(dá)習(xí)慣。產(chǎn)品說明書中相關(guān)技術(shù)內(nèi)容均應(yīng)與申請(qǐng)人提交的注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，則應(yīng)以規(guī)范格式對(duì)此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)列明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。

結(jié)合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求，HBeAg、抗-HBe檢測試劑說明書編寫應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注以下內(nèi)容。

1.預(yù)期用途

產(chǎn)品預(yù)期用途的描述應(yīng)符合現(xiàn)行的疾病診療規(guī)范、防治指南、專家共識(shí)，其臨床試驗(yàn)入組病例應(yīng)能夠覆蓋產(chǎn)品適用人群。如申報(bào)產(chǎn)品存在新的預(yù)期用途，應(yīng)有充分的臨床試驗(yàn)證據(jù)作為支持。

2.檢驗(yàn)結(jié)果的解釋

結(jié)合對(duì)照品（質(zhì)控品）以及樣本的檢測結(jié)果，對(duì)所有可能出現(xiàn)的結(jié)果組合及相應(yīng)的解釋進(jìn)行詳述。檢驗(yàn)結(jié)果的解釋應(yīng)以陽性判斷值的研究結(jié)論為依據(jù)。如有適用的臨床診療指南，則應(yīng)在此項(xiàng)下引用，相應(yīng)檢驗(yàn)結(jié)果的解釋應(yīng)符合相關(guān)指南的要求。

3.檢驗(yàn)方法的局限性

說明書應(yīng)對(duì)產(chǎn)品檢測的局限性進(jìn)行說明，主要包括以下內(nèi)容：

3.1本試劑檢測結(jié)果應(yīng)結(jié)合患者臨床癥狀及其他相關(guān)醫(yī)學(xué)檢查結(jié)果進(jìn)行綜合分析，不得單獨(dú)作為患者管理的依據(jù)。

3.2不合理的樣本采集、轉(zhuǎn)運(yùn)及處理以及不當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)操作和實(shí)驗(yàn)環(huán)境均有可能導(dǎo)致假陰性或假陽性結(jié)果。

3.3申報(bào)產(chǎn)品應(yīng)明確不同病程不同階段樣本的陽性率不一致。

三、參考文獻(xiàn)

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3.《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》，（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告2014年第17號(hào)），2014年9月11日.

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四、起草單位

國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評(píng)中心。